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微生物学中的质谱鉴定(MALDI-TOF)技术介绍

临床诊断实验室主要依赖于诊断感染的传统表型方法,有时还依赖基因测序技术。技术的最新进展包括已进入日常微生物实践的基质辅助激光解吸电离飞行时间 (MALDI-TOF) 质谱。MALDI-TOF 质谱法产生特定的质谱指纹,可以看作是微生物的独特特征,有助于准确识别属和种水平——具有用于菌株分型的巨大潜力。


细菌鉴定

几种利用 MALDI-TOF质谱的方法现在正在微生物诊断实验室中使用。一种方法将结果与市售质谱特征数据库进行比较以识别样本细菌,第二种方法使用蛋白质组数据库从测序基因组中识别细菌中的生物标志物质量。   第二种生物信息学方法允许培养物生长和样品处理条件的变化差异,而第一种方法在常规实验室方法中特别有用,例如诊断,并且可以区分物种和亚种。

鉴于其准确性,该技术还可以直接应用于各种临床样本,最显着的是血液、脑脊液、尿液、胸膜液和腹膜液。  由于当前 MALDI-TOF 协议的检测限制,主要限制是样本中存在的细菌数量。 为了绕过这个缺点,通常需要大量的血液和尿液样本,以及使用培养物作为血液的额外富集。


使用上述两种方法中的任何一种使用 MALDI-TOF 质谱法进行细菌鉴定的结果,诊断率和准确性在很大程度上取决于细菌分类和所用数据库的质量。


使用 MALDI-TOF 技术鉴定细菌的主要优势之一是结果的快速可用性,通常在不到一个小时内就可以准备好。  此外,MALDI-TOF 质谱法能够精确鉴定具有稀缺表型特征并且在 MALDI-TOF 时代之前需要进行 16S rRNA 基因测序的大量细菌。


真菌鉴定

MALDI-TOF 质谱法快速成功地用于真菌鉴定。  目前,该方法主要用于常规酵母鉴定,但需要进一步开发(尤其是在样品制备协议和数据库中)以将该方法用于其他真菌群(如皮肤癣菌和丝状真菌)。


与细菌的情况类似,MALDI-TOF 质谱法对真菌属和种的错误识别或未识别本质上是由于数据库中的错误、缺失或不完整的参考光谱造成的。  缺点是目前包含在商业上可访问的 MALDI-TOF 质谱系统数据库中的参考光谱不完整。


质谱鉴定MALDI-TOF优势

与传统的微生物鉴定方法相比,MALDI-TOF 质谱法在大多数情况下都能显着缩短工程师/技术人员的工作时间(准备样品)和周转时间(通过自动化分析程序获得结果)。


质谱鉴定应用范围

MALDI-TOF MS 用于各种行业,包括生物制药、有机化学、代谢组学和基因组学,以及临床和诊断和治疗应用。 在有机化学应用中,MALDI-TOF 用于分析 核酸 、蛋白质和聚合物质量,以及识别寡核苷酸和小蛋白质的复杂混合物,为生化和化学研究人员提供有用的信息。 MALDI-TOF MS 在促进患者快速诊断和改善健康结果方面发挥着至关重要的作用。 这方面的一个主要例子是它用于临床微生物学的患者样本中微生物的常规分类。


结论

总之,MALDI-TOF 质谱法是一种引人入胜的微生物鉴定新技术,它快速、高效、具有成本效益且易于使用。


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