GST pull down技术是体外条件下研究蛋白质相互作用的方法。先将体外表达的GST融合蛋白结合到谷胱甘肽Beads上,再将靶蛋白-GST-Beads和细胞裂解液孵育,这样互作蛋白便一起吸附在Beads上。洗涤掉未结合的蛋白后,再用洗脱液将互作蛋白复合物从Beads洗脱下来,即GST pull down产物。这种互作复合物既可以用Western Blot检测已知蛋白,也可用质谱鉴定出未知蛋白。
辉骏生物10年科研服务经验,专业提供分子互作实验服务,包括蛋白与蛋白、蛋白与DNA、蛋白与RNA、RNA与RNA的相互作用技术,经验丰富,实验结果稳定可靠。
我公司自有分子、细胞和质谱实验平台,能执行最优的实验路线,对微量互作蛋白的质谱鉴定有充足把控力,对后续功能分析有独到见解。
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蛋白-蛋白间的相互作用是蛋白质发挥生物学功能的主要模式,蛋白质会通过结合不同的伙伴来行驶不同的功能,形成复杂的信号转导网络。常见的蛋白相互作用方法主要有免疫共沉淀(Co-IP)、pull down、酵母双杂交、荧光双分子互补(BiFC)、荧光共定位等。
pull down技术将目标蛋白进行体外原核表达,使标签蛋白(GST或His等)与目标蛋白融合表达,借助标签的亲和介质将目标蛋白纯化出来,可以不受抗体、物种限制,比较轻松的获得目标蛋白的结合蛋白,还可以通过外源同时表达目标蛋白和待测蛋白,确定它们是否发生直接的相互作用,或者确定两个蛋白结合的结构域,但该方法无法得知体内真实的结合情况。
服务项目 | 服务内容 | 结果交付 | 实验周期 | 客户提供 | 价格 |
GST pull down WB (验证型) | 诱饵蛋白原核表达载体构建(选做) | 载体质粒、测序结果和实验报告 | 4-5周 | 诱饵基因质粒模板 实验样本 待测蛋白抗体 实验信息表 | |
诱饵蛋白原核表达和Western blot检测 | 诱饵蛋白Western blot检测图 | ||||
样本中待测蛋白的Western blot检测 | 待测蛋白Western blot检测图 | ||||
GST pull down捕获诱饵蛋白及其互作蛋白 (实验组、空载对照组) | 诱饵蛋白Western blot检测图 pull down实验报告 | ||||
GST pull down MS (筛选型) | 诱饵蛋白原核表达载体构建(选做) | 载体质粒、测序结果和实验报告 | 6-7周 | 诱饵基因质粒模板 实验样本 实验信息表 | |
诱饵蛋白原核表达和Western blot检测 | 诱饵蛋白Western blot检测图 | ||||
GST pull down捕获诱饵蛋白及其互作蛋白 (实验组、GST对照组、裂解液对照组) | 诱饵蛋白Western blot检测图 pull down实验报告 | ||||
LC-MS/MS检测及数据分析 | 质谱检测结果及报告 互作蛋白筛选表格 生物信息学分析结果和报告 |
样本类型 | GST pull down WB建议送样量 | GST pull down MS建议送样量 |
动物细胞 | 3*10e7个细胞/组(约3个10cm皿) | 5*10e7个细胞/组(约5个10cm皿) |
动物组织 | 1g/组 | 2g/组 |
植物叶片 | 2g/组 | 4g/组 |
植物根或果实 | 4g/组 | 8g/组 |
菌体 | 50ul菌体沉淀/组 | 100ul菌体沉淀/组 |
▲注意:这里列出的均为每组样本的送样量,如果实验和对照组用的样本一致,此样本量*2。详细送样指南可联系辉骏生物客服或销售索取。
保存及运输:-80℃保存,干冰取样/运输,至少在送样前2天通知我司。
GST pull down WB结果图(阳性)
GST Pull-down MS:Western blot检测图
GST pull-down MS:质谱检索表格(部分展示)
GST pull-down MS:互作蛋白生信分析结果(部分展示)
Chen S.L. et al: A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. Cancer Research. 2018. (中科院1区,IF=13.312).
糖代谢异常是癌症的突出特征,作者前期研究发现肝细胞癌(HCC)中糖原含量降低,并与患者总体生存情况不良相关,探索HCC中的异常糖代谢机制或许可以为肝细胞癌的治疗提供新靶点。本研究首次报道了HCC组织中的糖原含量显著降低,并与患者的不良预后相关,这归因于新发现的HBx/GYS2/p53信号轴。低表达的GYS2促进HCC细胞增殖而非迁移,并提供了两条独立的证据来支持GYS2和p53之间的关系。一方面,GYS2与MDM2竞争结合p53,以稳定p53免于蛋白酶体降解;另一方面,p53以负反馈方式抑制GYS2表达和糖原含量。这些数据表明p53和GYS2可能通过平衡彼此的表达而在HCC中发挥功能。
1. Yu C.P. et al: Flot2 acts as a novel mediator of podocyte injury in proteinuric kidney disease. 2023. Int J Biol Sci. 2区, IF=10.75. |
2. Chen S.L. et al: A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. 2018. Cancer Research. 1区, IF=13.312. |
3. You H. J. et al: Hepatitis B virus X protein promotes vimentin expression via LIM and SH3 domain protein 1 to facilitate epithelial-mesenchymal transition and hepatocarcinogenesis. Cell. 2021. Commun Signal. 2区, IF=8.4. 使用相关技术: GST-pull down实验,gst pull down-ms实验,LC-MS/MS蛋白质谱鉴定 |
4. Wang J. et al: ENO1 Binds to ApoC3 and Impairs the Proliferation of T Cells via IL-8/STAT3 Pathway in OSCC. 2022. Int J Mol Sci. 2区, IF=6.208. 【研究内容】:α-烯醇化酶(ENO1)是一种代谢酶,与口腔鳞状细胞癌(OSCC)淋巴转移有关。本研究通过GST pull down MS寻找与转移性OSCC患者术后淋巴引流液(PLD)中的ENO1相互作用的蛋白,发现了ENO1的新互作蛋白ApoC3。两者的结合引起白细胞介素(IL)-8的产生,进而激活Jurkat T细胞STAT3信号通路,促进细胞凋亡,抑制Jurkat T细胞增殖。 使用相关技术: GST pull-down MS实验,gst pulldown实验,LC-MS/MS质谱鉴定 |
辉骏实力
1. GST Pull down WB,用于体外检测诱饵蛋白与某样本中的待测蛋白是否存在相互作用;
2. GST Pull down MS,用于体外筛选诱饵蛋白与某样本中的哪些蛋白具有相互作用。
GST pull down检测服务 | |||||
服务项目 | 服务内容 | 结果交付 | 实验周期 | 客户提供 | 价格 |
GST pull down WB | 构建诱饵蛋白的GST原核表达载体(可选做) | 载体质粒、甘油菌、测序结果和实验报告 | 约2周 | 1、含有诱饵基因序列的质粒模板及测序文件 2、实验样本 3、待测蛋白抗体 4、实验信息表(样本信息、诱饵蛋白和待测蛋白序列) | |
原核表达诱饵蛋白并进行Western blot检测 | Western blot检测图 | 4-5周 | |||
Western blot检测待测样本中的猎物蛋白 | Western blot检测图 | ||||
GST pull down捕获诱饵蛋白及其互作蛋白 (2组:实验组、空载对照组) | pull down实验报告 | ||||
Western blot检测Pull down产物中的诱饵蛋白和待测蛋白 | Western blot检测图 | ||||
GST pull down MS | 构建诱饵蛋白的GST原核表达载体(可选做) | 载体质粒、甘油菌、测序结果和实验报告 | 约2周 | 1、含有诱饵基因序列的质粒模板及测序文件 2、实验样本 3、实验信息表(样本信息、诱饵蛋白序列) | |
原核表达诱饵蛋白并进行Western blot检测 | Western blot检测图 | 4-5周 | |||
GST pull down捕获诱饵蛋白及其互作蛋白 (3组:实验组、空载对照组、裂解液对照组) | pull down实验报告 | ||||
Western blot检测pull down产物中的诱饵蛋白 | Western blot检测图 | ||||
LC-MS/MS定性检测pull down产物的蛋白、筛选实验组独有蛋白(潜在互作蛋白) | 质谱检索表格、互作蛋白筛选表格、检测报告 | ||||
针对互作蛋白做生物信息学分析(GO、KEGG pathway、String) | 生物信息学分析结果和报告 | 1周 |
样本类型 | GST pull down WB建议送样量 | GST pull down MS建议送样量 |
动物细胞 | 3*10e7个细胞/组(约3个10cm皿) | 5*10e7个细胞/组(约5个10cm皿) |
动物组织 | 1g/组 | 2g/组 |
植物叶片 | 2g/组 | 4g/组 |
植物根或果实 | 4g/组 | 8g/组 |
菌体 | 50ul菌体沉淀/组 | 100ul菌体沉淀/组 |
▲注意:这里列出的均为每组样本的送样量,如果实验和对照组用的样本一致,此样本量*2。详细送样指南可联系辉骏生物客服或销售索取。
(1)样本用PBS清洗干净后,离心去掉液体,先放入液氮中速冻,再转移至-80℃冰箱中保存;
(2)样本一定要做好标记,应用油性防冻记号笔或标签纸在管上注明样本名称或编号;
(3)样本较多或需要分批做,要将样本分装;
(4)干冰取样/运输;需要至少在送样前一天通知我方。
gst pull down WB:Western blot检测图(阳性)
GST Pull-down MS:Western blot检测图
GST pulldown MS:质谱检索表格(部分展示)
GST pulldown MS蛋白生信分析结果示例
1. Chen S.L. et al: A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. 2018. Cancer Research. 1区, IF=13.312. 使用相关技术: gst pulldown测定、GST-pull down质谱分析、GST标签蛋白 |
2. Jiang L. et al: Bach1 Represses Wnt/β-Catenin Signaling and Angiogenesis. Circ Res. 2015,IF=14.467. |
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货号 | 规格 | 货期 | 价格 |
FI8804-20T | 20次 | 现货 | |
FI8804-40T | 40次 | 现货 |
辉骏生物的GST
pull-down试剂盒能够高效调取GST融合蛋白在各类样本中的互作蛋白。在GST
pull-down实验前,先通过基因工程技术手段将目标基因和GST基因序列连接起来,并导入大肠杆菌中进行原核表达和纯化,之后融合蛋白通过GST标签与固相化在载体上的GTH(
Glutathione)亲和结合。接下来,当样本中与融合蛋白有相互作用的蛋白通过层析柱时或与此固相复合物混合时就可被吸附而分离。
试剂名称 | 体积(20 Tests) | 体积(40 Tests) | 保存条件 |
GST标签纯化树脂 | 950 μL | 1.9 mL | 4 ℃ |
裂解缓冲液(PH 7.4) | 24 mL | 48 mL | 4 ℃ |
漂洗缓冲液(5×) | 70 mL | 140 mL | 4 ℃ |
洗脱缓冲液(PH 2.0) | 1.1 mL | 2.2 mL | 4 ℃ |
蛋白酶抑制剂 | 600 μL | 1.2 mL | -20 ℃ |
1、调取效率高:GST融合蛋白与树脂亲和力强,可以高效纯化目标蛋白及其互作蛋白;
2、适用范围广,优化的裂解液配方适用于动物、植物组织、微生物等各类型组织和细胞样本;
3、洗脱液适配后续Western Blot及质谱(LC-MS/MS)实验;
4、操作简便,耗时短,适用于初学者。
1. 通过原核表达系统表达带有GST标签的融合蛋白;
2. 在细菌上清液中加入GST标签亲和纯化树脂,4 ℃孵育2 小时;
3. 将待测样本裂解液加入上述体系中,4 ℃孵育过夜;
4. 漂洗、洗脱得到目标蛋白及其互作蛋白复合物。
1. Ni P.Y. et al: YBX1-Mediated DNA Methylation-Dependent SHANK3 Expression in PBMCs and Developing Cortical Interneurons in Schizophrenia. Advanced Science. 2023. IF=17.521.
2. Chen R. et al: Lnc-GD2H Promotes Proliferation by Forming a Feedback Loop With c-Myc and Enhances Differentiation Through Interacting With NACA to Upregulate Myog in C2C12 Myoblasts. Front Cell Dev Biol. 2021, IF=6.684.
3. Ma Y. et al: New insights into the proteins interacting with the promoters of silkworm fibroin genes. Scientific Reports. 2021, IF=4.379.
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