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服务介绍

稳定细胞株构建技术实验原理


稳转细胞株构建是将外源DNA通过质粒转染或病毒感染的方法导入细胞,实现基因稳定表达或干扰的技术。由于慢病毒可将外源片段稳定整合入宿主细胞基因组,因此特别适合用于稳转细胞株的构建。慢病毒感染比质粒转染更容易操作,并且对各类细胞的转导效率都很高,筛选周期短。


转入外源基因的细胞选用与载体抗性标签对应的药物进行细胞筛选,从而得到可稳定表达/沉默目的基因的细胞株。最常用的抗性筛选标志物有新霉素(neomycin)、潮霉素(hygromycin)和嘌呤霉素(puromycin) 。


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稳定细胞株构建技术实验流程


稳转株构建实验流程.jpg





稳定细胞株构建服务信息


辉骏生物提供的稳转细胞株构建服务主要分为以下两种:


稳转细胞株构建服务
服务项目服务内容结果交付实验周期客户提供
表达稳转株构建构建基因表达慢病毒载体载体质粒、甘油菌、测序结果和报告2-3周

1.细胞及其培养方法

2. 实验信息表(相关基因信息、载体要求等)

包装基因表达慢病毒筛选好的表达细胞株、对照细胞株和报告9-10周
感染并筛选稳定表达细胞株
qPCR检测表达效率检测结果和报告
shRNA稳转株构建针对基因序列设计并构建3个shRNA慢病毒载体载体质粒、甘油菌、测序结果和报告2-3周

1.细胞及其培养方法

2. 实验信息表(相关基因信息、载体要求等)

shRNA质粒转染293T细胞进行干扰效率检测干扰效率检测结果和报告2周
干扰效率最高的shRNA质粒包装慢病毒 筛选好的shRNA细胞株、对照细胞株和报告9-10周
感染并筛选稳定表达细胞株
qPCR检测表达效率检测结果和报告





稳转细胞株构建技术服务*辉骏优势


近十年服务经验,众多服务案例,服务成果得到优秀期刊认可

自有分子及细胞生物实验平台,能有效制定并执行最优的实验路线

售后技术支持将一直保持到客户发表文章,确保客户安心进行下游实验及投稿






稳定细胞株构建实验结果示例


稳定细胞系荧光检测图

稳定细胞系荧光检测图






稳定细胞株构建-客户文章


1637896170298984.png  Yang T. et al: CD151 promotes Colorectal Cancer progression by a crosstalk involving CEACAM6, LGR5 and Wnt signaling via TGFβ1. Int J Biol Sci. 2021, IF 6.58.

【研究内容】:研发发现CD151在结直肠癌(colorectal cancer, CRC)组织中表达较高,能促进癌细胞增殖、迁移和侵袭。RNA-seq和CoIP-MS实验同时检测和筛选了受CD151表达影响且与CD151相互作用的蛋白质,发现了3个蛋白——TGFβ1,CEACAM6和LGR5。pull down和免疫荧光实验确定了它们间的相互作用。基因沉默和回复实验进一步表明,CD151可能通过TGFβ1来促进CEACAM6、LGR5和Wnt通路。

使用技术:shRNA慢病毒载体构建、慢病毒包装、稳转细胞株构建



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  Wu M.H. et al: MafF Is Regulated via the circ-ITCH/miR-224-5p Axis and Acts as a Tumor Suppressor in Hepatocellular Carcinoma. Oncol Res. 2020, IF=5.574.

【研究内容】:本研究发现肝癌组织和细胞中MafF(一种转录因子)的表达较低。慢病毒介导的MafF过表达抑制HCC细胞增殖并诱导细胞凋亡。生物信息学分析和荧光素酶实验确定了MafF是miR-224-5p的直接靶点。RNA pull down实验表明,circ-ITCH可作为miR-224-5p海绵发挥作用。基因表达/回复实验进一步阐明,MafF的表达和抗肿瘤作用可通过circ-ITCH/miR-224-5p轴调节。本研究证实了MafF在HCC中的抑癌作用,揭示了MafF的上游调控机制,为HCC的潜在治疗靶点提供了新的视角。

使用技术:过表达慢病毒载体构建、慢病毒包装、稳转细胞株构建


1637896170298984.png  Ma H.H. et al: Pharmacological Properties of the Type 1 Tyramine Receptor in the Diamondback Moth, Plutella xylostella. Int J Mol Sci. 2019, IF=5.923.

【研究内容】:酪胺受体(TAR)可被酪胺(TA)或章鱼胺(OA)激活,并已被证明与多种昆虫的生理调节(如味觉反应、社会组织和学习行为)有关。作者在小菜蛾中新克隆得到一个酪胺受体基因Pxtar1,并在293T细胞中利用慢病毒进行了该基因的稳定表达,功能实验也显示酪胺可以激活PxTAR1受体,此外,作者还调查了Pxtar1在小菜蛾体内的表达模式。

使用技术:过表达慢病毒载体构建检测、慢病毒包装技术服务、稳转细胞株构建实验


1637896170298984.png  He S.L. et al: FAM3B promotes progression of oesophageal carcinoma via regulating the AKT–MDM2–p53 signalling axis and the epithelial‐mesenchymal transition. J Cell Mol Med. 2019, IF=5.31.

【研究内容】:本研究发现FAM3B在人食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中高表达,且与患者不良预后有相关性。慢病毒介导的FAM3B过表达抑制ESCC细胞凋亡,促进ESCC细胞迁移和侵袭。进一步研究证实,FAM3B调节AKT-MDM2-p53通路和EMT的两个核心标记物Snail和E-钙粘蛋白。这些发现提示FAM3B可能是ESCC的一个有希望的分子靶点和诊断标记物。

使用技术:慢病毒载体构建技术、慢病毒包装外包服务、稳转细胞株构建实验



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  Sun H. et al: The FEN1 L209P mutation interferes with long-patch base excision repair and induces cellular transformation. Oncogene. 2016, IF=9.867

【研究内容】:FEN1是一种含特殊结构的核酸酶,对维持人基因组的稳定性中有重要作用。本研究发现了与直肠癌相关的新FEN1突变,L209P。该突变缺乏FEN1的侧翼内切酶活性、外切酶活性及缺口内切酶活性,但保留了DNA结合特性。体内和体外的基因表达实验表明,L209P突变能干扰野生型FEN1的功能,且对基因损伤更敏感,从而导致细胞内基因组的不稳定和细胞转化。

使用技术:慢病毒载体构建技术、慢病毒包装实验、稳转细胞株构建实验检测


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