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ChainFree^® 系列标签抗体免疫共沉淀试剂盒简介

       DNA重组技术使目标蛋白带上特定标签，表达的融合蛋白再采用标签抗体来检测，为科学研究带来了极大便利。常见的蛋白标签包括Flag、HA、Myc、V5等，这些标签分子量小，对融合蛋白的活性和细胞内定位几乎没有影响。  

        针对不同样本的需求，辉骏生物开发了分别针对植物和动物样本的5款ChainFree^®标签抗体免疫共沉淀试剂盒：

        实验前先将Flag标签、HA标签或GFP标签等与目标蛋白在样本中融合表达。裂解样本后，将标签抗体磁珠加入样本中，标签抗体与目标融合蛋白及其结合蛋白形成复合体，去除未结合的蛋白后，可以采用多种方法洗脱蛋白质。分离的蛋白产物既可以用Western blot检测已知蛋白，也可以用质谱（LC-MS/MS）鉴定未知蛋白。

免疫共沉淀CoIP试剂盒的应用方向

蛋白-蛋白间的相互作用是蛋白质发挥生物学功能的主要模式，蛋白质会通过结合不同的伙伴来行驶不同的功能，形成复杂的信号转导网络。CO-IP试剂盒采用Flag抗体磁珠、HA抗体磁珠、Myc抗体磁珠、GFP抗体磁珠或mCherry抗体磁珠捕获样本中天然结合的Flag融合蛋白、HA融合蛋白、Myc融合蛋白、GFP融合蛋白或mCherry融合蛋白，以及它们的互作蛋白，不需要购买诱饵蛋白的IP级别抗体，只需要在细胞或组织中表达融合flag标签的诱饵蛋白，即可以利用标签抗体完成内源性Co-IP实验。以下列举了可应用COIP试剂盒的几个研究方向：

1. 病毒、细菌等病原体侵染宿主细胞的机制；

2. 酶和底物的作用机制；

3. 天然状态蛋白调控复合体的研究。

 ChainFree^®系列CoIP试剂盒-辉骏生物产品优势

1. 无抗体轻重链污染：IP复合物无论采用非变性洗脱还是变性洗脱，均不会出现抗体的轻、重链污染问题。

2. 亲和力强：低nM级别亲和力，轻松应对低拷贝基因，或难转染细胞系。

3. 特异性强：抗体磁珠通过了20株以上的空白细胞系检测，不易产生非特异吸附。

4. 结合量高：每10 µL抗体磁珠可结合约10~15 µg重组蛋白。

5. 兼容性好：无论标签在诱饵蛋白的N端或C端，都可以识别。

6. 稳定性好：通过了45℃高温测试。

辉骏生物ChainFree^®标签抗体磁珠与其他同类产品对比图

Western-Blot结果显示：辉骏生物的ChainFree^® 磁珠对诱饵蛋白的亲和力强，IP效果优于sigma产品，远高于国产同类磁珠效果，并且不会产生抗体轻重链污染。

辉骏生物ChainFree^®标签抗体磁珠稳定性测试图

Western-Blot结果显示：ChainFree® 磁珠在45℃条件下放置7天，稳定性几乎不受影响。

Flag/HA/Myc/GFP/mCherry标签免疫共沉淀试剂盒使用流程简述

1. 裂解样本；

2. 样本裂解液与Flag磁珠（或HA磁珠、V5磁珠）孵育；

3. 漂洗、洗脱得到目标蛋白及其互作蛋白复合物。

Anti-Flag CoIP试剂盒使用案例

Co-IP western-blot结果图

Flag免疫共沉淀（flag co-ip）试剂盒—客户文章

1. Li H.B. et al: The plant ESCRT component FREE1 shuttles to the nucleus to attenuate abscisic acid signaling. Nature Plants. 2019，IF=17.352. 【研究内容】：客户发现，作为内体蛋白分选转运复合体成分之一的FREE1基因，受到脱落酸刺激时候会发生磷酸化并移位到细胞核。客户利用酵母双杂交技术找到两个核蛋白ABF4 and ABI5会与FREE1结合，免疫共沉淀CoIP实验进一步证实了FREE与这两个蛋白的互作。后续实验表明，FREE1通过抑制ABF4、ABI5对下游基因的调控能力，参与了脱落酸信号通路。 使用相关技术：质谱鉴定、免疫共沉淀CoIP、Co-IP MS实验