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Flag免疫共沉淀试剂盒（Flag Co-IP） * 产品简介

辉骏生物的Flag免疫共沉淀试剂盒能够高效完成细胞或组织中Flag标签蛋白的纯化及其互作蛋白的调取。FLAG-tag由8个氨基酸残基“N-DYKDDDDK-C (1012 Da)”组成，免疫共沉淀实验前，先通过基因工程技术手段将目的基因和FLAG-tag基因序列连接起来，并导入细胞或组织中表达，再用Flag标签免疫共沉淀试剂盒来调取和纯化诱饵蛋白及其互作蛋白。分离的蛋白产物既可以用Western blot检测已知蛋白，也可以用质谱（LC-MS/MS）鉴定未知蛋白。

Flag免疫共沉淀试剂盒 * 产品应用

蛋白-蛋白间的相互作用是蛋白质发挥生物学功能的主要模式，蛋白质会通过结合不同的伙伴来行驶不同的功能，形成复杂的信号转导网络。Flag CO-IP试剂盒采用Flag树脂捕获样本中天然结合的Flag融合蛋白及其互作蛋白，不需要购买诱饵蛋白的IP级别抗体，只需要在细胞或组织中表达融合flag标签的诱饵蛋白，即可以利用Flag抗体完成内源性Co-IP实验。以下列举了可应用Flag CO-IP试剂盒的几个研究方向：

1. 病毒、细菌等病原体侵染宿主细胞的机制；

2. 酶和底物的作用机制；

3. 天然状态蛋白调控复合体的研究。

Flag免疫共沉淀试剂盒 * 组分（20次）

Flag免疫共沉淀试剂盒 * 产品优势

1、特异性强：亲和材料经过特殊优化，与诱饵蛋白结合力更强，调取的互作蛋白更多。

2、适用范围广：优化的裂解液配方适用于动物、植物组织、微生物等各类型组织和细胞样本；

3、洗脱液适配后续Western Blot及质谱（LC-MS/MS）实验。

4、操作简便，耗时短，适用于初学者。

Flag免疫共沉淀试剂盒使用 * 流程简述

1. 裂解样本；

2. 样本裂解液与Flag树脂孵育；

3. 漂洗、洗脱得到目标蛋白及其互作蛋白复合物。

Flag免疫共沉淀试剂盒 * 使用案例

Co-IP western-blot结果图

免疫共沉淀（Co-IP）试剂盒 * 客户文章

1. Li H.B. et al: The plant ESCRT component FREE1 shuttles to the nucleus to attenuate abscisic acid signaling. Nature Plants. 2019，IF=17.352. 【研究内容】：客户发现，作为内体蛋白分选转运复合体成分之一的FREE1基因，受到脱落酸刺激时候会发生磷酸化并移位到细胞核。客户利用酵母双杂交技术找到两个核蛋白ABF4 and ABI5会与FREE1结合，免疫共沉淀CoIP实验进一步证实了FREE与这两个蛋白的互作。后续实验表明，FREE1通过抑制ABF4、ABI5对下游基因的调控能力，参与了脱落酸信号通路。 使用相关技术：质谱鉴定、免疫共沉淀CoIP、Co-IP MS实验

2. Jiang, S. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP. Cancer Research.2019，IF= 13.312. 【研究内容】：客户利用蛋白质组学技术，筛选出胆固醇致前列腺癌发生上皮间质转变（EMT）的重要基因APMAP和EGFR。通过在前列腺癌细胞表达3*Flag-APMAP基因，并利用免疫共沉淀CoIP及质谱鉴定技术，客户发现EPS15R可与APMAP结合。进一步的研究证实，体内EPS15R-APMAP复合物通过EGFR致使细胞发生EMT。 使用相关技术：蛋白质组学、质谱鉴定、免疫共沉淀CoIP

3. Huang C.Y. et al: UBAP2L arginine methylation by PRMT1 modulates stress granule assembly. Cell Death Differ. 2020 , IF=12.067. 【研究内容】：前期研究表明UBAP2L蛋白参与应激颗粒形成。客户在这项研究中，用免疫共沉淀结合质谱等技术，发现PRMT1甲基化UBAP2L，UBAP2L蛋白并且和另外三个应激颗粒形成有关的重要蛋白有相互作用。这些蛋白复合物介导了应激颗粒的形成。 使用相关技术：CoIP技术服务、质谱鉴定、修饰位点鉴定

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