miRNA pull down实验简介

miRNA pull-down是研究目标miRNA与其他RNA或RNA结合蛋白（RBPs）之间相互作用的技术。 

体外miRNA pull-down：首先合成生物素标记的miRNA探针（也可以是pre-miRNA或pri-miRNA探针），在体外条件下将其结合到链霉亲和素磁珠上，再与待测样本裂解液孵育，捕获与miRNA结合的其他RNA（如mRNA、lncRNA和circRNA）或RBPs；提取的RNA可以采用qPCR方法检测，洗脱的蛋白质可以采用western-blot或质谱（LC-MS/MS）技术检测。 

体内miRNA pull-down：将生物素标记的miRNA探针转染到细胞中，裂解细胞后，采用链霉亲和素磁珠捕获样本裂解液中的生物素miRNA-RNA复合物；随后，洗脱纯化得到RNA，并进行高通量测序或qPCR检测。

miRNA pull down实验流程

图一：miRNA pull-down调取结合蛋白原理图

图二：miRNA pull down调取结合RNA原理图

miRNA pull-down应用背景

MicroRNA（miRNA）是真核生物中广泛存在的一种长约21~23个核苷酸的RNA分子。miRNA的产生也是一个高度调控的多步骤过程。首先，携带miRNA信息的基因被转录成初级miRNA（pri-miRNA），再被Drosha复合体剪切成具有茎环结构的前体miRNA（pre-miRNA），最后被Dicer复合体进一步切割，产生成熟的miRNA。成熟的miRNA与Argonaute蛋白等组装形成RNA诱导的沉默复合体（RISC），常常特异性结合靶RNA（例如mRNA、lncRNA、circRNA）并调控其表达。 

每个miRNA可以有多个靶基因，而几个miRNAs也可以调节同一个基因，并且这种调控是动态变化的。此外，从miRNA的生成、转运到发挥功能，都需要很多蛋白质的参与。因此，研究miRNA与RNA、蛋白质的结合对揭示很多生物学现象具有重要意义。

技术支持联系

18927549347、13430303037

miRNA pulldown实验—辉骏生物服务内容

服务项目	服务内容	结果交付	实验周期	客户提供	价格
体外miRNA Pull-down qPCR	合成生物素miRNA探针	探针合成报告	5-6周	miRNA序列  待测RNA序列  实验样本	点击询价
	qPCR检测样本中的待测靶RNA	Input qPCR检测结果
	miRNA pull-down捕获miRNA-靶RNA复合体并检测 （实验组、对照组）	pull-down qPCR检测结果  pull-down实验报告
体内miRNA Pull-down qPCR	合成生物素miRNA探针	探针合成报告	7-8周	miRNA序列  待测RNA序列  待转染细胞及其培养方法	点击询价
	qPCR检测样本中的待测靶RNA	Input qPCR检测结果
	miRNA探针转染细胞	pull-down qPCR检测结果  pull-down实验报告
	miRNA pull-down捕获miRNA-靶RNA复合体并检测 （实验组、对照组）
体外miRNA Pull-down WB	合成生物素miRNA探针	探针合成报告	5-6周	miRNA序列  待测RNA序列  待测蛋白序列  待测蛋白抗体	点击询价
	Western blot（WB）检测样本中的待测靶蛋白	Input WB检测结果
	miRNA pull-down捕获miRNA-靶蛋白复合体并检测 （实验组、对照组）	pull-down WB检测结果  pull-down实验报告
体外miRNA Pull-down MS	合成生物素miRNA探针	探针合成报告	6-7周	miRNA序列  实验样本	点击询价
	miRNA pull-down捕获miRNA-靶蛋白复合体 （实验组、对照组）	pull-down产物SDS-PAGE图  pull-down实验报告
	LC-MS/MS检测和数据分析	质谱检测结果和报告  互作蛋白筛选表格
	生物信息学分析（GO、KEGG pathway、String）	生物信息学分析结果和报告

miRNA Pull-down样本要求

1. 送样量要求

样本类型	miRNA pull down WB/qPCR建议送样量	miRNA pull down MS建议送样量
动物细胞	2*10e7个细胞/组（约2个10cm皿）	3*10e7个细胞/组（约3个10cm皿）
动物组织	1g/组	2g/组

▲注意：以上均为每组样本的送样量，如果实验和对照组用的样本一致，此样本量*2。详细送样指南可联系辉骏生物索取。

2. 样本运输要求

（1）样本一定要做好标记，应用油性防冻记号笔或标签纸在管上注明样本名称或编号；

（2）样本较多或需要分批做，要将样本分装；

（3）干冰取样/运输；需要至少在送样前一天通知我方。

miRNA Pull Down结果示例

miRNA pull down WB检测图（阳性）

      

miRNA pull down qPCR检测结果（阳性）

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miRNA pull-down参考文献