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His标签蛋白琼脂糖纯化树脂产品信息

His标签蛋白琼脂糖纯化树脂以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸（NTA）为配体，螯合镍离子（Ni2+）后，形成非常稳定的八面体结构，镍离子处于八面体的中心，这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻，更加稳定，可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。该产品可在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化。

His标签蛋白纯化树脂产品属性

His纯化树脂使用案例

小量蛋白纯化操作方法（参考）

 
1. 样本准备（以大肠杆菌表达的蛋白纯化为例）
（1）挑取单菌落到含有适合抗性的LB培养基中，根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。
（2）表达结束后，将培养液转至离心瓶，7000 rpm，离心15 min，收集菌体，然后加入菌液体积1/10的裂解缓冲液（添加PMSF，终浓度为1 mM），也可同时加入其他蛋白酶抑制剂，但不能影响目的蛋白与树脂的结合。
（3）之后加入溶菌酶，使其工作浓度为1 mg/mL。
注：如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE，可以不加入溶菌酶。
（4）将菌体沉淀悬浮起来（如果菌液浓度高，可考虑加入10 µg/mL RNase A和5 µg/mL DNase I），混匀，置于冰上超声破碎细胞，至菌液基本保持澄清。
（5）收集上述澄清蛋白液至离心管中，10000 rpm，4℃离心20~30 min。取上清，置于冰上备用或 - 20℃保存。

2. His标签融合蛋白纯化
(1)  根据蛋白表达量取适量体积的 His纯化树脂至尖底离心管中，加入5倍树脂体积的漂洗缓冲液，颠倒混匀30次，500 g离心5 min，弃上清。
(2)  重复漂洗一次，500 g离心5 min，弃上清。
(3)  向树脂中加入含His融合蛋白的大肠杆菌裂解液（总体积不要超过离心管体积的2/3)，放混匀仪上4 ℃孵育2~4 h。
(4)  4 ℃ 500 g离心5 min，弃上清。
(5)  加入10倍树脂体积漂洗缓冲液，颠倒混匀30次，4 ℃ 500g离心5 min，弃上清；重复该漂洗操作两次，500 g离心5 min，弃上清。

3. 洗脱
(1)  SDS-PAGE上样缓冲液洗脱法（变性洗脱法）：得到的蛋白样品适合SDS-PAGE电泳或Western Blot检测。加入50 μL 2×SDS-PAGE上样缓冲液，95ºC加热5分钟。4 ℃ 12000 g离心 5 min，收集上清至新的离心管中。
(2)  非变性洗脱法：洗脱后的蛋白保持原有的生物活性，便于后续检测（例如SDS-PAGE、Western-blot、质谱实验等）。每10 μL树脂，加入10 μL洗脱缓冲液，涡旋震荡20 s，放混匀仪上室温洗脱10~15 min，涡旋震荡20 s；4 ℃ 12000 g离心 5 min，收集上清至新的离心管中，- 80℃保存或直接用于后续实验。

注意事项

1.  本产品仅限于科学研究使用，不得用于临床诊断或治疗。
2.  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。