串联亲和纯化质谱TAP-MS * 实验介绍
串联亲和纯化质谱（TAP MS）技术采用两轮纯化的方法调取诱饵蛋白及其互作蛋白复合体。首先，在目的细胞中过表达带有TST-Flag双标签的诱饵蛋白；样本经裂解后，先与Streptactin树脂孵育、初次洗涤及洗脱，得到首次纯化的蛋白复合物；再将此蛋白复合物与anti-Flag树脂结合、再次洗涤及洗脱，得到第二轮纯化的蛋白复合物；最后，质谱鉴定复合物中的诱饵蛋白互作蛋白。
辉骏生物10年科研服务经验，专业提供分子互作实验服务，包括蛋白与蛋白、蛋白与DNA、蛋白与RNA、RNA与RNA的相互作用技术，经验丰富，实验结果稳定、可靠。
我公司自有分子、细胞和质谱实验平台，能执行最优的实验路线，对微量互作蛋白的质谱鉴定有充足把控力，对后续功能分析有独到见解。
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目前，客户已在Nature子刊、Oncogene、Cell Research等高水平期刊成功发表大量高分文章（点击查看客户文献）。
串联亲和纯化质谱TAP-MS * 实验流程
串联亲和纯化质谱TAP MS * 应用背景
随着确定细胞内蛋白质的相互作用成为当今生命科学的研究热点，双杂交技术已经广泛应用于研究蛋白—蛋白间的相互作用，但由于其筛选步骤复杂，假阳性结果较多，难于量化，故不能满足大规模蛋白质研究的需要，因此串联亲和纯化（TAP）技术以其高效、高纯度、以及能够高度模拟真实生理条件等优势，迅速成为筛选、发现和鉴别新的相互作用蛋白质的主流技术之一。
目前，TAP技术与质谱技术的联用，以及质谱技术的自动化，使得大规模地分析相互作用的蛋白质在技术上成为可能。
TAP技术采用两步亲和纯化，提高了纯化产物的特异性，具有周期短、假阳性结果少等优点。通过这种方法鉴定到的蛋白质相互作用能真实地反映出细胞中蛋白质分子之间的联系，实验结果更加接近真实情况，而且TAP技术还特别适用于蛋白质组水平上的大规模研究。
| TAP（串联亲和纯化）检测服务 |
| 服务项目 | 服务内容 | 结果交付 | 实验周期 | 客户提供 | 价格
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| TAP MS | 构建诱饵蛋白的TAP双标签表达载体
| 载体质粒、甘油菌、测序结果和实验报告 | 约2周 | 含有诱饵基因序列的质粒模板及测序文件 待测细胞及其培养方法 实验信息表（样本信息、诱饵蛋白序列） |
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| 包装慢病毒并进行诱饵蛋白的稳定表达细胞株筛选 | 慢病毒包装和稳转株实验报告 | 5-6周 |
| Western blot检测样本（input）中的诱饵蛋白 | Western blot检测图 | 7-8周 |
TAP调取诱饵蛋白及其互作蛋白 （2组：实验组、空载对照组） | TAP实验报告 |
| Western blot检测TAP产物中的诱饵蛋白 | Western blot检测图 |
| LC-MS/MS定性检测TAP产物的蛋白、筛选实验组独有蛋白（潜在互作蛋白） | 质谱检索表格、互作蛋白筛选表格、检测报告
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| 针对互作蛋白做生物信息学分析（GO、KEGG pathway、String） | 生物信息学分析结果和报告 | 1周 |
串联亲和纯化TAP MS * 结果示例
TAP MS：Western blot检测图
TAP MS：质谱检索表格（部分展示）
TAP-MS实验研究案例—客户文章解析
Hadir Marei. et al: Differential Rac1 signalling by guanine nucleotideexchange factors implicates FLII in regulating Rac1-driven cell migration.
Nat Communications. 2016，IF=14.919.
鸟嘌呤核苷酸交换因子的差异rac1信号涉及FLII在调节rac1驱动的细胞迁移中的作用
研究概述
小的GTP酶 rac1与肿瘤的形成和扩散有关。当被鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)激活时，rac1与细胞中的各种蛋白质结合，从而调节各种功能，包括细胞迁移。然而，当在临床环境中以rac1为靶点时，rac1的激活可以导致相反的迁移表型，增加了加剧肿瘤进展的可能性。这就需要确定影响rac1驱动的细胞运动的因素。本研究证实P-Rex1不仅能激活rac1，而且还能将蛋白质(如FLII)定向到rac1的活性形式，以介导特定的细胞功能，包括细胞收缩，从而使P-Rex1能够促进细胞迁移。因此，这项研究提供了对以前未报道的P-REx1-rac1介导细胞迁移的细胞功能的洞察力，并强调了P-Rex1和rac1可能驱动癌症扩散其他模式。
研究路线
过表达与 pull down实验证实Tiam1和P-Rex1诱导不同的rac1下游效应
通过TAP/ SILAC结合的方法检测 Tiam1或 P-Rex1诱导后的rac1相互作用体，证实Tiam1和P-Rex1对racl互动体有不同的调控作用
免疫共沉淀、 GST pull down和PLA实验结果证实FLII优先与活性racl结合FLII是一种新的富含P-RExl的rac1结合伙伴
结构域分析证实FLII通过不同的结构域与rac1和P-Rex1结合
Pull down实验和细胞迁移实验证实FLII是P-REx1-rac1驱动的细胞迁移所必需的
基因敲除实验表明P-Rex1可以通过FLII介导特定的细胞功能，包括细胞收缩，从而促进细胞迁移
TAP MS * 客户文章
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