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Protein G树脂产品信息

Protein G 是从 G 类链球菌中分离出来的胞壁蛋白，能与哺乳动物的 IgG 重链 Fc 段结合。 Protein G Agarose 是用于分离、纯化免疫球蛋白 G (IgG) 的亲和层析介质。
       辉骏生物生产的 Protein G Agarose 以高度交联的 4% 琼脂糖凝胶为基质， 通过化学方法定向、高效偶联了重组 Protein G。 哺乳动物、植物、细菌、酵母、昆虫等多种生物的细胞或组织裂解液、细胞分泌液上清、血清、动物腹水以及其它的免疫抗原等均适用本产品。

Protein G树脂产品属性

Protein G树脂使用案例

(1) Input：样本裂解液；  (2)  IgG：normal IgG的IP产物（对照组）；   (3)  Anti-Bait：诱饵蛋白抗体的IP产物（实验组）。

Protein G树脂使用方法（参考）

 
1. 抗原样本制备
（1）将收集好的样本置于冰上， 每组样本加入 300~500 μL 预冷的裂解缓冲液，吹打混匀。

（2）a. 动物样本： 最好冰上超声至溶液基本澄清； 如果无超声条件， 可以置于冰上裂解 30 min，间隔手动混匀。
         b. 植物、微生物样本：冰上超声破碎至溶液基本澄清。
（3）4℃ 12000 g 离心 15 min，收集上清至新的离心管中，取 30 μL 作为 input，剩余置于冰上备用或- 80℃保存。

2. 免疫共沉淀
(1)  向样本裂解液中加入适量抗体（按照抗体说明书添加），混匀仪上室温孵育 1~2 h 或 4 ℃过夜。
(2)  取出 Protein G 树脂， 上下颠倒混匀， 取 30~50 μL 树脂到新的离心管中。
(3)  加入 200 µL 漂洗液，颠倒混匀 30 次，500 g离心5 min，弃上清； 重复该漂洗操作一次。
(4)  向上步树脂中加入步骤（1）的样本/抗体混合物，放混匀仪上室温孵育 1 h 或 4 ℃孵育 2 h， 4 ℃ 500 g 离心 5 min，弃上清。
(5)  加入 500 μL 漂洗液，颠倒混匀 30 次，4 ℃ 500 g离心5 min，弃上清；重复该漂洗操作两次，共漂洗三次。

3. 洗脱
(1)  SDS-PAGE上样缓冲液洗脱法（变性洗脱法）：加入30~50 μL 1×SDS-PAGE上样缓冲液，95ºC加热5分钟。12000 g离心 30 s， 收集上清至新的离心管中。 该洗脱产物适合于 SDS-PAGE 或 Western Blot 检测。
(2)  非变性洗脱法：加入 30~50 μL 酸性洗脱缓冲液，涡旋震荡 20 s，放混匀仪上室温洗脱 10~15 min，涡旋震荡20 s； 4 ℃ 12000 g离心 5 min，收集上清至新离心管中，并立即滴入占总体积1/10体积的中和缓冲液，将洗脱产物 pH 调节至中性，- 80 ℃保存或直接用于后续实验。洗脱后的蛋白保持原有的生物活性，便于后续检测（例如SDS-PAGE、Western-blot、质谱实验等）。

注意事项

1.  本产品仅限于科学研究使用，不得用于临床诊断或治疗。
2.  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。