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服务介绍

荧光素酶 (Luciferase)报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测荧光素酶活性的一种报告系统。双荧光素酶报告基因系统指的是在同一细胞中同时表达两种荧光素酶——萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶,利用一个报告基因作为内参来校正另一个报告基因,从而减少细胞活性和转染效率对实验结果的影响。

双荧光素酶报告基因可用于检测启动子活性,或者转录因子和启动子的结合。



 

miRNA靶基因验证技术原理


miRNAs常与靶基因的非翻译区(常为3’UTR)结合,从而抑制整个mRNA的翻译。将待测的miRNA结合位点序列(靶基因3‘UTR全长或结合位点附近500bp序列)构建到荧光素酶基因的下游,将该质粒与miRNA mimics共转染待测细胞;如果miRNA能够结合待测序列,则会抑制上游荧光素酶表达,使荧光素酶底物发光减弱;根据化学发光值判断miRNA是否与待测序列结合。

 



miRNA靶基因验证应用范围


1.miRNA与靶基因结合验证

2.ceRNA机制研究:当加入竞争性的lncRNA或circRNA时,可以通过观察Luciferase活性的变化判断mRNA-miRNA-LncRNA(或circRNA)三者是否存在ceRNA调控机制。

 



miRNA靶基因验证实验技术流程


荧光素酶载体构建
细胞转染

荧光素酶检测

数据分析






miRNA靶基因验证技术服务*辉骏优势


化学发光法检测,反应非常灵敏,可以有效的检测体内微小的调控作用。

操作简便,检测结果直观。




miRNA靶基因验证服务信息


项目名称

客户提供

结果交付

实验周期

miRNA靶基因验证细胞样本
实验信息表(miRNA序列,3’UTR序列或靶点序列,细胞培养信息等)

 

报告基因载体(野生和突变型)
双荧光素酶检测结果
实验报告

5-6周(不含细胞培养周期)
ceRNA研究

细胞样本
实验信息表(miRNA序列,3’UTR序列或靶点序列,lncRNA或circRNA序列,细胞培养信息等)


 

报告基因载体(野生和突变型)lncRNA或circRNA表达载体
双荧光素酶检测结果
实验报告
5-6周(不含细胞培养周期)



miRNA靶基因验证实验-客户文章


1637896170298984.png  Ma L. et al: miR-9, a MYC/MYCN-activated microRNA, regulates E-cadherin and cancer metastasis. Nat Cell Biol. 2010, IF=28.824

【研究内容】:本研究发现miR-9在乳腺癌中上调,基因表达和双荧光素酶实验发现miR-9通过直接靶向编码E-cadherin蛋白的mRNA“CDH1“来下调其表达,导致细胞运动性和侵袭性增加,进而激活β-catenin信号,导致VEGF表达的升高。同时,ChIP实验发现MYC和MYCN可以结合miR-9-3在基因组中的位点从而激活miR-9。这些发现揭示了miR-9促进癌症转移的一个新的调控信号通路。

使用技术:双荧光素酶(Luc)实验、基因过表达/干扰检测、ChIP技术服务



1637896170298984.png

  Sun YQ. et al: Long non-coding RNA HOTTIP promotes BCL-2 expression and induces chemoresistance in small cell lung cancer by sponging miR-216a.Cell Death Dis. 2018, IF= 8.469.

【研究内容】:本研究发现一种lncRNA“HOTIP“与小细胞肺癌(SCLC)的化疗敏感性、癌细胞增殖和患者不良预后有关。通过miRNA芯片和双荧光素酶确定了HOTIP可以结合miR-216a,之后又采用双荧光素酶检测、RNA pull down MS和RIP等实验,确定了他们三者间的ceRNA调控机制:HOTIP通过结合miR-216a来减轻其对抗凋亡因子BCL-2的抑制作用。这些成果阐述了HOTIP在小细胞肺癌进展中的新作用。

使用技术:双荧光素酶检测服务、RNA pull down MS实验


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