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服务介绍

lncRNA与microRNA互作概述


lncRNA (Long non-coding RNA)即长链非编码RNA,通常长度在200-100000 nt,具有5’帽子和3’polyA尾巴结构。

lncRNAs作用范围广泛,机制非常复杂,可以与DNA、RNA、蛋白质互作,参与表观、转录、转录后等多个层面的调控,在生命活动中有重要作用。lncRNA与miRNA的结合是其重要的调控方式之一,lncRNA作为“miRNA海绵”,抑制miRNA与mRNA的结合,促进mRNA表达,该机制被称为ceRNA调控机制。





lncRNA与microRNA互作服务信息


目前主要有两类方法用于研究lncRNA与microRNA的互作,一是双荧光素酶报告基因法,二是RNA pull down法。


lncRNA与microRNA互作技术服务
技术类型
技术目标技术原理
双荧光素酶验证lncRNA与miRNA结合将待测lncRNA序列构建到荧光素酶基因的下游,该质粒与miRNA mimics共转染待测细胞;如果miRNA能够结合lncRNA,则会抑制上游荧光素酶表达,使荧光素酶催化底物的光强减弱,根据化学发光值判断miRNA是否与待测lncRNA结合
双荧光素酶验证ceRNA机制将待测mRNA的3’UTR序列构建到荧光素酶基因的下游,该质粒与miRNA mimics、lncRNA表达载体共转染待测细胞;与lncRNA空载对照组相比,当转入lncRNA表达载体时,miRNA对靶基因3’UTR的调控减弱,说明三者间存在ceRNA调控
外源性RNA pull down验证lncRNA与miRNA结合体外转录带有生物素标记的lncRNA,并与样本裂解液孵育,之后利用链霉亲和素磁珠捕获体外条件下结合的靶RNA-蛋白质复合物,采用Western Blot或质谱技术确定复合物中的蛋白质
内源性RNA pull down
验证lncRNA与miRNA结合将自主研发的特异性RNA标签与目标lncRNA构建融合表达载体,转染细胞使其融合表达,通过与特异性RNA标签结合的亲和介质,将RNA标签-lncRNA与miRNA的复合体纯化出来,采用qPCR法检测待测miRNA





lncRNA与microRNA互作服务优势


1

十年服务经验,众多服务案例,服务成果得到优秀期刊认可


2
自有分子及细胞生物实验平台,能有效制定并执行最优的实验路线


3
售后技术支持将一直保持到客户发表文章,确保客户安心进行下游实验及投稿






lncRNA与microRNA互作研究案例


lncRNA-miRNA互作文献图.png


研究背景


肝细胞癌(HCC)极易发生转移。TGF-β诱导的上皮-间充质转化(EMT)在癌细胞扩散中的作用已被证实,但lncRNAs在TGF信号转导中的作用仍不清楚。




研究路线


1
2

对HCC细胞和TGF-β诱导HCC细胞的基因表达检测发现lncRNA-ATB表达水平较高

RIP、RNA pull down、双荧光素酶和基因表达实验证实对EMT和肿瘤侵袭有抑制作用的miR-200家族可结合lncRNA-ATB

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表达检测和荧光素酶实验表明lncRNA与ZEB1或ZEB2竞争结合miR-200s,三者存在ceRNA调控

细胞实验、肝组织检测和小鼠模型实验均表明lncRNA-ATB通过上述ceRNA作用诱导EMT并促进癌细胞侵袭

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RIP、RNA pull down等实验筛选并确定了与lncRNA-ATB结合的mRNA“IL-11”

细胞实验、肝组织检测和小鼠模型实验均表明lncRNA-ATB以不依赖于miR-200s的方式促进IL-11 mRNA稳定性,进而激活STAT3信号,促进癌转移




研究结论


TGF-β激活的lncRNA(lncRNA-ATB)在肝细胞癌(HCC)转移中上调,并与不良预后相关。本研究从两个方向揭示了lncRNA促进HCC转移的机制:(1)lncRNA-ATB通过竞争性结合miR-200家族上调ZEB1和ZEB2,诱导EMT和侵袭;(2)lncRNA-ATB通过结合IL-11mRNA、自分泌诱导IL-11和触发STAT3信号,促进癌细胞转移到其它部位。


 

客户文献


Yuan J.H. et al: A Long Noncoding RNA Activated by TGF-b Promotes the Invasion-Metastasis Cascade in Hepatocellular Carcinoma. Cancer cell. 2014.





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