基因表达稳转株构建(转座子系统)技术原理
转座子(transposons)是基因组中的“跳跃者”,能够作为独立的单位从基因组的一个位置移动到另一个位置,也被称为“跳跃基因”。按照转座机制的不同,可分为反转录转座子和 DNA 转座子两类。
DNA转座子(DNA transposons)通过“剪切-粘贴”机制进行,包括转座酶表达、移动、插入三个阶段。转座酶识别转座子两端的末端重复序列(ITRs),将转座子从原来的位置解离下来,再重新整合到基因组上。
目前在脊椎动物中应用最多的三大转座子是:PiggyBac(PB)、睡美人Sleeping Beauty(SB)和Tol2。
辉骏生物利用PiggyBac转座子系统进行基因表达稳转株的构建,通过对转座子系统质粒的精心优化,使得转座效率更高,能够实现外源基因(尤其是大片段基因)的高水平表达,该技术可以替代慢病毒感染法,用于快速构建稳转细胞株,其特点是:低成本、高效率、可插入大片段基因、基因表达稳定。

基因表达稳转株构建(转座子系统)技术优势
piggyBac载体装载量大,在5’TR和3’TR之间能携带长达27 kb的DNA,可用于大片段目的基因的表达
通过酶促反应插入目的基因,整合效率远高于DNA随机插入效率
基因表达稳转株构建(转座子系统)实验流程图

基因表达稳转株构建(转座子系统) * 辉骏服务内容
服务内容 | 交付内容 | 周期 | 价格
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1. 预实验: 细胞检测:细胞转导测试、抗性筛选测试、基因本底检测 |
1、过表达稳转细胞株:2个T25瓶(10^6 次方/瓶) 2、空载对照细胞株:2个T25瓶(10^6 次方/瓶) 3、结题报告:质粒构建、细胞筛选、表达检测等操作和结果 |
6-9周 |
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2. 正式实验: PiggyBac载体构建、电转细胞、抗性筛选、RT-qPCR表达检测、细胞扩大培 养和保存 |
基因表达稳转株构建 * 辉骏服务优势

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效果保障,不成功不收费 无效全额退款,100%保证目标基因编辑/表达效果 | 效率保障 快至6周即可交付合格细胞株,高效实验流程 | 售后保障 实验疑问随时快速响应,专业技术团队全程跟进 |

