免疫共沉淀（Co-IP）* 实验原理

结合了抗体的磁珠或树脂（Beads）与样本裂解液孵育，通过”抗原-抗体“之间的免疫作用，诱饵蛋白被吸附在Beads上，与此同时，诱饵蛋白的互作蛋白，也一起“共沉淀”到Beads上。洗涤去掉未结合的蛋白后，再用洗脱缓冲液将互作蛋白复合物从Beads上洗脱下来，得到免疫共沉淀（Co-IP）产物。Co-IP产物既可以用Western Blot检测已知蛋白，也可以用质谱鉴定未知蛋白。

当没有合适的诱饵蛋白抗体时，还可以通过表达融合了Flag标签的诱饵蛋白，利用Flag标签抗体做免疫沉淀。即样本过表达Flag-Bait，经裂解后与anti-Flag珠子孵育，诱饵融合蛋白与Beads结合，其互作蛋白“共沉淀”到Beads上，再经洗涤、洗脱后，用WB或质谱检测。

免疫共沉淀（Co-IP）* 实验流程

内源蛋白抗体免疫共沉淀CoIP实验步骤

标签抗体免疫共沉淀CoIP实验流程

免疫共沉淀（Co-IP）* 应用背景

蛋白质之间相互作用是其发挥生物学功能的主要模式，蛋白质会通过结合不同的伙伴来行驶不同的功能，形成复杂的信号转导网络。常见的蛋白互作研究方法主要有：免疫共沉淀（Co-IP）、pull down、酵母双杂交、荧光双分子互补（BiFC）、荧光共定位等。这些方法相互补充，通过多种方法共同验证蛋白质间的相互作用，能更大程度的避免假阳性结果。

技术支持联系

18927549347、13430303037

免疫共沉淀Co-IP * 辉骏服务内容

免疫共沉淀CoIP * 样本要求

▲注意：这里列出的均为每组样本的送样量，如果实验和对照组用的样本一致，此样本量*2。详细送样指南可联系辉骏生物客服或销售索取。

 保存及运输：-80℃保存，干冰取样/运输，至少在送样前2天通知我司。

免疫共沉淀Co-IP * 结果示例

Co-IP WB：诱饵蛋白和待测蛋白Western blot检测图（阳性）

Co-IP MS：诱饵蛋白Western blot检测图

Co-IP MS：质谱检索表格（部分展示）

Co-IP MS：互作蛋白生信分析结果（部分展示）

技术支持联系

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免疫共沉淀（Co-IP）服务案例—客户文章解析

Jiang S.Y. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP.

 Cancer Research. 2019. (中科院1区，IF=13.312).

胆固醇通过APMAP抑制EGFR降解诱导前列腺癌细胞转移

研究概述

转移性前列腺癌具有很高的致命性。已有报道表明，胆固醇与前列腺癌的发展有关；前期研究发现，胆固醇可以诱导前列腺癌细胞发生上皮-间质转化（EMT），但其作用及潜在机制尚不清楚。本研究证明胆固醇介导APMAP上调，APMAP通过与EGFR竞争结合EPS15R，进而抑制EGFR降解，激活ERK1/2通路，促进前列腺癌细胞EMT；提出APMAP可能是一种关键的调节剂，为高脂肪饮食、肥胖和癌症转移之间提供了联系。

研究路线

免疫共沉淀（Co-IP） * 客户文章

1. Li H.B. et al: The plant ESCRT component FREE1 shuttles to the nucleus to attenuate abscisic acid signaling. Nature Plants. 2019，IF=17.352. 【研究内容】：客户发现，作为内体蛋白分选转运复合体成分之一的FREE1基因，受到脱落酸刺激时候会发生磷酸化并移位到细胞核。客户利用酵母双杂交技术找到两个核蛋白ABF4 and ABI5会与FREE1结合，免疫共沉淀CoIP实验进一步证实了FREE与这两个蛋白的互作。后续实验表明，FREE1通过抑制ABF4、ABI5对下游基因的调控能力，参与了脱落酸信号通路。 使用相关技术：质谱鉴定、免疫共沉淀co-ip、Co-IP MS实验

2. Jiang, S. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP. Cancer Research.2019，IF= 13.312. 【研究内容】：客户利用蛋白质组学技术，筛选出胆固醇致前列腺癌发生上皮间质转变（EMT）的重要基因APMAP和EGFR。通过在前列腺癌细胞表达3*Flag-APMAP基因，并利用免疫共沉淀CoIP及质谱鉴定技术，客户发现EPS15R可与APMAP结合。进一步的研究证实，体内EPS15R-APMAP复合物通过EGFR致使细胞发生EMT。 使用相关技术：蛋白质组学、质谱鉴定、免疫共沉淀CoIP

3. Huang C.Y. et al: UBAP2L arginine methylation by PRMT1 modulates stress granule assembly. Cell Death Differ. 2020 , IF=12.067. 【研究内容】：前期研究表明UBAP2L蛋白参与应激颗粒形成。客户在这项研究中，用免疫共沉淀结合质谱等技术，发现PRMT1甲基化UBAP2L，UBAP2L蛋白并且和另外三个应激颗粒形成有关的重要蛋白有相互作用。这些蛋白复合物介导了应激颗粒的形成。 使用相关技术：coip技术服务、质谱鉴定、修饰位点鉴定

免疫共沉淀（CoIP）* 辉骏服务优势

辉骏实力

辉骏生物提供的Co-IP免疫共沉淀服务分为以下两种：

1. Co-IP WB，用于检测某样本中的诱饵蛋白和待测蛋白是否存在相互作用；

2. Co-IP MS，用于筛选某样本中的诱饵蛋白与哪些蛋白具有相互作用。

加技术专员微信了解Co-IP实验服务排期、优惠等

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CoIP实验技术服务样本要求

1. 送样量要求

▲注意：这里列出的均为每组样本的送样量，如果实验和对照组用的样本一致，此样本量*2。详细送样指南可联系辉骏生物客服或销售索取。

2. 样本保存和运输要求：

（1）样本用PBS清洗干净后，离心去掉液体，先放入液氮中速冻，再转移至-80℃冰箱中保存；

（2）样本一定要做好标记，应用油性防冻记号笔或标签纸在管上注明样本名称或编号；

（3）样本较多或需要分批做，要将样本分装；

（4）干冰取样/运输；需要至少在送样前一天通知我方。

免疫共沉淀coip实验结果图例

Co-IP WB：诱饵蛋白和待测蛋白Western blot检测图（阳性）

Co-IP MS：诱饵蛋白Western blot检测图

Co-IP MS：质谱检索表格（部分展示）

Co-IP（免疫共沉淀）实验服务客户文章

1. Li H.B. et al: The plant ESCRT component FREE1 shuttles to the nucleus to attenuate abscisic acid signaling. Nature Plants. 2019，IF=17.352. 【研究内容】：客户发现，作为内体蛋白分选转运复合体成分之一的FREE1基因，受到脱落酸刺激时候会发生磷酸化并移位到细胞核。客户利用酵母双杂交技术找到两个核蛋白ABF4 and ABI5会与FREE1结合，免疫共沉淀CoIP实验进一步证实了FREE与这两个蛋白的互作。后续实验表明，FREE1通过抑制ABF4、ABI5对下游基因的调控能力，参与了脱落酸信号通路。 使用相关技术：质谱鉴定、免疫共沉淀CoIP、Co-IP MS实验

2. Jiang, S. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP. Cancer Research.2019，IF= 13.312. 【研究内容】：客户利用蛋白质组学技术，筛选出胆固醇致前列腺癌发生上皮间质转变（EMT）的重要基因APMAP和EGFR。通过在前列腺癌细胞表达3*Flag-APMAP基因，并利用免疫共沉淀CoIP及质谱鉴定技术，客户发现EPS15R可与APMAP结合。进一步的研究证实，体内EPS15R-APMAP复合物通过EGFR致使细胞发生EMT。 使用相关技术：蛋白质组学、质谱鉴定、免疫共沉淀CoIP

3. Huang C.Y. et al: UBAP2L arginine methylation by PRMT1 modulates stress granule assembly. Cell Death Differ. 2020 , IF=12.067. 【研究内容】：前期研究表明UBAP2L蛋白参与应激颗粒形成。客户在这项研究中，用免疫共沉淀结合质谱等技术，发现PRMT1甲基化UBAP2L，UBAP2L蛋白并且和另外三个应激颗粒形成有关的重要蛋白有相互作用。这些蛋白复合物介导了应激颗粒的形成。 使用相关技术：CoIP技术服务、质谱鉴定、修饰位点鉴定

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免疫共沉淀试剂盒（Co-IP试剂盒）简介

辉骏生物的免疫共沉淀试剂盒能够高效完成抗原的免疫沉淀（IP）及免疫共沉淀（Co-IP）实验。首先，将特异性的抗体加入样品中与目标抗原形成免疫复合物，然后将其结合在protein G或protein A/G beads上。通过漂洗去除未结合物质后，用低 pH 的洗脱液将免疫复合物从beads上洗脱下来。洗脱的蛋白产物既可以用Western blot检测已知蛋白，也可以用质谱（LC-MS/MS）鉴定未知蛋白。

免疫共沉淀CoIP试剂盒应用

蛋白-蛋白间的相互作用是蛋白质发挥生物学功能的主要模式。CO-IP试剂盒采用Protein G或Protein A/G beads来捕获目标蛋白抗体，进而捕获样本中天然结合的目标蛋白及其互作蛋白。以下列举了可应用CO-IP试剂盒的几个研究方向：

1. 病毒、细菌等病原体侵染宿主细胞的机制；

2. 酶和底物的作用机制；

3. 天然状态下蛋白调控复合体的研究。

CoIP免疫共沉淀试剂盒组分

Co-IP免疫共沉淀试剂盒优势

   

1、特异性强：亲和材料经过特殊优化，与诱饵蛋白结合力更强，调取的互作蛋白更多。

2、裂解效率高：不同优化的裂解液配方分别适用于动物、植物样本。

3、洗脱液适配后续Western Blot及质谱（LC-MS/MS）实验。

4、操作简便，耗时短，适用于初学者。

5、应用灵活：可用于任何内源性目标蛋白的免疫沉淀或免疫共沉淀实验。

免疫共沉淀Co-IP试剂盒使用流程简述

1. 将细胞裂解液与所选抗体在室温下孵育 1-2 小时，或 4 ℃ 过夜。

2. 在室温下，将抗原/抗体复合物与protein G或ProteinA/G beads结合 1-2 小时。

3. 漂洗、洗脱得到目标蛋白及其互作蛋白复合物。

CoIP试剂盒-客户文献

1. Jiang, S. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP. Cancer Research. 2019. IF= 13.312.

2. Huang C.Y. et al: UBAP2L arginine methylation by PRMT1 modulates stress granule assembly. Cell Death Differ. 2020. IF=12.067. 

3. Li T. et al: Phosphorylated ATF1 at Thr184 promotes metastasis and regulates MMP2 expression in gastric cancer. J Transl Med. 2022. IF=8.44.