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服务介绍

载体构建技术实验原理


载体构建是分子生物学研究中最常用的实验技术,可用于体外条件下基因(包括mRNA,lncRNA,circRNA,miRNA)的过表达、干扰、突变、插入或缺失实验,或用于载体改造等。


在基因工程中,常用人工构建的含有多克隆位点和抗性基因的质粒作为载体。首先采用PCR等方法体外扩增外源的目标DNA片段,之后依靠限制性内切酶的切割和DNA连接酶的连接,将外源DNA片段构建到质粒上;质粒转化大肠杆菌或者转染细胞,可以使外源DNA片段复制或表达。





载体构建技术实验流程


1
引物设计与合成


2
PCR扩增目的基因


3
制备线性化载体


4
同源重组连接目的基因和载体


5
转化大肠杆菌,筛选阳性菌落


6
菌落PCR鉴定、酶切鉴定和测序






载体构建实验服务信息


骏生物提供的我公司主要的载体类型有:真核表达载体,原核表达载体,慢病毒表达载体,慢病毒干扰载体,circRNA表达载体,荧光素酶报告基因载体,植物表达载体,克隆载体等(请详询销售或客服人员)


项目名称

客户提供

结果交付

实验周期

载体构建

待构建的基因模板(也可委托我方全基因合成)
待构建的载体(我方已有的载体可免费提供)
实验信息表(基因序列,载体要求等)
质粒或甘油菌可用冰袋保存运输

1、构建好的载体质粒约3ug
2、构建好的载体甘油菌1ml
3、载体图谱
4、原始测序文件和拼接文件
5、实验报告

2-4周





载体构建技术服务*辉骏优势


1

十年服务经验,客户成果发表在NatureMethods,Oncogene,Cell Research等高水平期刊上。

2

自有分子及细胞生物实验平台,能有效制定并执行最优的实验路线

3

售后技术支持将一直保持到客户发表文章,确保客户安心进行下游实验及投稿。







载体构建实验-客户文章


1637896170298984.png  Sun C. et al: Oncofetal gene SALL4 reactivation by hepatitis B virus counteracts miR-200c in PD-L1-induced T cell exhaustion. Nat Commum. 2018,IF= 14.919.

【研究内容】:本研究通过基因表达检测、原位杂交、双荧光素酶、ChIP等实验发现HBV相关性肝细胞癌的SALL4或PD-L1表达与miR-200C水平和患者生存期呈负相关,高水平miR-200C直接靶向CD274 (编码PD-L1)来降低其表达。成年期HBV诱导导致STAT3激活,使SALL4蛋白重新表达,从而抑制miR-200c转录。HBV-pSTAT3-SALL4-miR-200C信号通路可调节PD-L1的表达,针对该通路的治疗策略可能会逆转病毒诱导的免疫衰竭。

使用技术:shRNA慢病毒载体构建技术服务、载体构建实验



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  Chen R. et al: Lnc-GD2H Promotes Proliferation by Forming a Feedback Loop With c-Myc and Enhances Differentiation Through Interacting With NACA to Upregulate Myog in C2C12 Myoblasts. Front Cell Dev Biol. 2021, IF= 6.684.

【研究内容】:本研究通过双荧光素酶,ChIP,DNA pull down和RNA pull down,RIP等实验发现lnc-GD2H在肌肉再生中的作用:在成肌细胞增殖过程中,c-Myc蛋白与lnc-GD2H启动子结合并调节其转录,促进成肌细胞增殖;在成肌细胞分化过程中,lnc-GD2H与成肌细胞分化相关蛋白NACA相互作用,抑制其在Myog启动子的富集,减轻NACA对Myog的抑制作用,促进Myog表达和成肌细胞分化。

使用技术:双荧光素酶载体构建、ChIP、DNA pull down、RNA pull down,RIP


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  Fu X.Q. et al: Activation of STAT3 is a key event in TLR4 signaling-mediated melanoma progression. Cell Death Dis. 2020, IF= 8.469.

【研究内容】:本研究通过基因表达/敲除、细胞功能检测,动物实验,双荧光素酶分析等实验,发现人黑色素瘤中TLR4的表达与STAT3的激活/磷酸化呈正相关,TLR4配体通MYD88和TRIF激活黑色素瘤细胞中的STAT3,促进了肿瘤的生长。当抑制黑色素瘤中STAT3的功能时,TLR4激活产生的效应减弱,说明STAT3激活对TLR4信号介导的黑色素瘤发展至关重要,为黑色素瘤的病理生理学提供了新的线索。

使用技术:基因调取检测服务、真核表达载体构建实验


1637896170298984.png  Cai X.D. et al: LncRNA ILF3-AS1 mediated the occurrence of epilepsy through suppressing hippocampal miR-212 expression. Aging-US. 2020, IF=5.682.

【研究内容】:本研究通过基因过表达、双荧光素酶等实验发现LncRNA ILF3-AS1在颞叶癫痫(TLE)患者的海马和血清中水平升高,ILF3-AS1通过靶向miR-212诱导炎性细胞因子和MMP3、MMP9的表达。值得注意的是,针对ILF3-AS1/miR212/MMP3/9轴的治疗策略可能是治疗TLE的有效方法。

使用技术:真核表达载体构建检测实验、基因调取外包服务



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  Ma H.H. et al: Pharmacological Properties of the Type 1 Tyramine Receptor in the Diamondback Moth, Plutella xylostella. INT J MOL SCI. 2019, IF=5.923.

【研究内容】:酪胺受体(TAR)可被酪胺(TA)或章鱼胺(OA)激活,并已被证明与多种昆虫的生理调节(如味觉反应、社会组织和学习行为)有关。作者在小菜蛾中新克隆得到一个酪胺受体基因Pxtar1,并在293T细胞中利用慢病毒进行了该基因的稳定表达,功能实验也显示酪胺可以激活PxTAR1受体,此外,作者还调查了Pxtar1在小菜蛾体内的表达模式。

使用技术:过表达慢病毒载体构建、慢病毒包装


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