载体构建技术实验原理
载体构建是分子生物学研究中最常用的实验技术，可用于体外条件下基因（包括mRNA，lncRNA，circRNA，miRNA）的过表达、干扰、突变、插入或缺失实验，或用于载体改造等。
在基因工程中，常用人工构建的含有多克隆位点和抗性基因的质粒作为载体。首先采用PCR等方法体外扩增外源的目标DNA片段，之后依靠限制性内切酶的切割和DNA连接酶的连接，将外源DNA片段构建到质粒上；质粒转化大肠杆菌或者转染细胞，可以使外源DNA片段复制或表达。
载体构建技术实验流程
载体构建实验服务信息
辉骏生物提供的主要载体类型有：真核表达载体，原核表达载体，慢病毒表达载体，慢病毒干扰载体，circRNA表达载体，荧光素酶报告基因载体，植物表达载体，克隆载体等（请详询销售或客服人员）
项目名称 | 客户提供 | 结果交付 | 实验周期 | 价格
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| 载体构建 | 待构建的基因模板（也可委托我方全基因合成）
待构建的载体（我方已有的载体可免费提供）
实验信息表（基因序列，载体要求等）
质粒或甘油菌可用冰袋保存运输 | 1、构建好的载体质粒约3ug
2、构建好的载体甘油菌1ml
3、载体图谱
4、原始测序文件和拼接文件
5、实验报告
| 2-4周 |
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载体构建技术服务*辉骏优势
十年服务经验，客户成果发表在NatureMethods，Oncogene，Cell Research等高水平期刊上。
自有分子及细胞生物实验平台，能有效制定并执行最优的实验路线。
售后技术支持将一直保持到客户发表文章，确保客户安心进行下游实验及投稿。
载体构建实验-客户文章
【研究内容】：本研究通过基因表达检测、原位杂交、双荧光素酶、ChIP等实验发现HBV相关性肝细胞癌的SALL4或PD-L1表达与miR-200C水平和患者生存期呈负相关，高水平miR-200C直接靶向CD274 (编码PD-L1)来降低其表达。成年期HBV诱导导致STAT3激活，使SALL4蛋白重新表达，从而抑制miR-200c转录。HBV-pSTAT3-SALL4-miR-200C信号通路可调节PD-L1的表达，针对该通路的治疗策略可能会逆转病毒诱导的免疫衰竭。
使用技术：shRNA慢病毒载体构建技术服务、载体构建实验
【研究内容】：本研究通过双荧光素酶，ChIP，DNA pull down和RNA pull down，RIP等实验发现lnc-GD2H在肌肉再生中的作用：在成肌细胞增殖过程中，c-Myc蛋白与lnc-GD2H启动子结合并调节其转录，促进成肌细胞增殖；在成肌细胞分化过程中，lnc-GD2H与成肌细胞分化相关蛋白NACA相互作用，抑制其在Myog启动子的富集，减轻NACA对Myog的抑制作用，促进Myog表达和成肌细胞分化。
使用技术：双荧光素酶载体构建、ChIP、DNA pull down、RNA pull down，RIP
【研究内容】：本研究通过基因表达/敲除、细胞功能检测，动物实验，双荧光素酶分析等实验，发现人黑色素瘤中TLR4的表达与STAT3的激活/磷酸化呈正相关，TLR4配体通MYD88和TRIF激活黑色素瘤细胞中的STAT3，促进了肿瘤的生长。当抑制黑色素瘤中STAT3的功能时，TLR4激活产生的效应减弱，说明STAT3激活对TLR4信号介导的黑色素瘤发展至关重要，为黑色素瘤的病理生理学提供了新的线索。
使用技术：基因调取检测服务、真核表达载体构建实验
【研究内容】：本研究通过基因过表达、双荧光素酶等实验发现LncRNA ILF3-AS1在颞叶癫痫（TLE）患者的海马和血清中水平升高，ILF3-AS1通过靶向miR-212诱导炎性细胞因子和MMP3、MMP9的表达。值得注意的是，针对ILF3-AS1/miR212/MMP3/9轴的治疗策略可能是治疗TLE的有效方法。
使用技术：真核表达载体构建检测实验、基因调取外包服务
【研究内容】：酪胺受体（TAR）可被酪胺（TA）或章鱼胺（OA）激活，并已被证明与多种昆虫的生理调节（如味觉反应、社会组织和学习行为）有关。作者在小菜蛾中新克隆得到一个酪胺受体基因Pxtar1，并在293T细胞中利用慢病毒进行了该基因的稳定表达，功能实验也显示酪胺可以激活PxTAR1受体，此外，作者还调查了Pxtar1在小菜蛾体内的表达模式。
使用技术：过表达慢病毒载体构建、慢病毒包装
辉骏实力
实验热线：4006991663
