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服务介绍

慢病毒包装实验原理


慢病毒(Lentivirus)是以人类免疫缺陷型病毒(HIV)为基础发展起来的基因工具,已剔除毒性基因,属于假型病毒,安全性高;它能同时感染分裂细胞和非分裂细胞,可将携带的外源基因整合到细胞基因组中实现基因的高效表达。


慢病毒包装系统由三部分组成:

1. 含有外源基因片段、外源基因的启动子,以及其它病毒包装、整合所需的顺式作用元件,如HIV-1 的5’LTR 和 3’LTR以及其他辅助元件等。

2. 包装质粒:共2或3个,分别表达产生病毒包装所必需的蛋白质(反式作用元件)。

3. 包装细胞:293T 细胞株,能够在慢病毒载体和包装质粒mix 共转染后包装出慢病毒


携带外源基因的慢病毒载体与包装质粒共转染293T包装细胞,一段时间后收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,经浓缩和纯化的慢病毒液可以用于感染宿主细胞或活体动物。


 




慢病毒包装实验服务流程


慢病毒包装实验流程





慢病毒包装技术优势

慢病毒为整合型病毒,可实现外源基因或shRNA、miRNA稳定、持久的表达,更适合于基因功能研究

 更高的转导效率,可以高效的表达外源基因

慢病毒感染率高,适用范围广(可感染分裂细胞和非分裂细胞),特别适合于质粒转染效率低的细胞

 包装流程简便,可以一次性获得大量病毒且滴度高。




 

慢病毒包装服务信息


辉骏生物提供的慢病毒包装服务主要分为以下三种:


慢病毒包装服务
服务项目服务内容
结果交付实验周期客户提供
表达慢病毒包装
表达慢病毒包装
载体质粒、甘油菌、测序结果和报告2-3周实验信息表(相关基因信息、载体要求、病毒量要求)
包装基因表达慢病毒
基因表达慢病毒液和对照慢病毒液3-4周
检测慢病毒滴度滴度检测报告
shRNA慢病毒包装采用客户提供的shRNA或siRNA序列构建shRNA慢病毒载体载体质粒、甘油菌、测序结果和报告2周
实验信息表(相关基因信息、载体要求、病毒量要求)
包装shRNA慢病毒shRNA慢病毒液和对照慢病毒液3-4周
检测慢病毒滴度滴度检测报告
3+1 shRNA慢病毒包装针对基因序列设计并构建3个shRNA慢病毒载体
载体质粒、甘油菌、测序结果和报告2-3周实验信息表(相关基因信息、载体要求、病毒量要求)
shRNA质粒转染293T细胞进行干扰效率检测干扰效率检测结果和报告2周
干扰效率最高的shRNA质粒包装慢病毒
shRNA慢病毒液和对照慢病毒液3-4周
检测慢病毒滴度滴度检测报告







慢病毒包装结果示例


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慢病毒包装滴度检测图






慢病毒包装实验服务*辉骏优势


1

十年服务经验,客户成果发表在NatureMethods,Oncogene,Cell Research等高水平期刊上。

2

自有分子及细胞生物实验平台,能有效制定并执行最优的实验路线

3

售后技术支持将一直保持到客户发表文章,确保客户安心进行下游实验及投稿。






慢病毒包装实验服务-客户文章


1637896170298984.png  Yang T. et al: CD151 promotes Colorectal Cancer progression by a crosstalk involving CEACAM6, LGR5 and Wnt signaling via TGFβ1. Int J Biol Sci. 2021, IF 6.58.

【研究内容】:研发发现CD151在结直肠癌(colorectal cancer, CRC)组织中表达较高,能促进癌细胞增殖、迁移和侵袭。RNA-seq和CoIP-MS实验同时检测和筛选了受CD151表达影响且与CD151相互作用的蛋白质,发现了3个蛋白——TGFβ1,CEACAM6和LGR5。pull down和免疫荧光实验确定了它们间的相互作用。基因沉默和回复实验进一步表明,CD151可能通过TGFβ1来促进CEACAM6、LGR5和Wnt通路。

使用技术:shRNA慢病毒载体构建、慢病毒包装、稳转细胞株构建



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  Wu M.H. et al: MafF Is Regulated via the circ-ITCH/miR-224-5p Axis and Acts as a Tumor Suppressor in Hepatocellular Carcinoma. Oncol Res. 2020, IF=5.574.

【研究内容】:本研究发现肝癌组织和细胞中MafF(一种转录因子)的表达较低。慢病毒介导的MafF过表达抑制HCC细胞增殖并诱导细胞凋亡。生物信息学分析和荧光素酶实验确定了MafF是miR-224-5p的直接靶点。RNA pull down实验表明,circ-ITCH可作为miR-224-5p海绵发挥作用。基因表达/回复实验进一步阐明,MafF的表达和抗肿瘤作用可通过circ-ITCH/miR-224-5p轴调节。本研究证实了MafF在HCC中的抑癌作用,揭示了MafF的上游调控机制,为HCC的潜在治疗靶点提供了新的视角。

使用技术:过表达慢病毒载体构建、慢病毒包装、稳转细胞株构建


1637896170298984.png  Ma H.H. et al: Pharmacological Properties of the Type 1 Tyramine Receptor in the Diamondback Moth, Plutella xylostella. Int J Mol Sci. 2019, IF=5.923.

【研究内容】:酪胺受体(TAR)可被酪胺(TA)或章鱼胺(OA)激活,并已被证明与多种昆虫的生理调节(如味觉反应、社会组织和学习行为)有关。作者在小菜蛾中新克隆得到一个酪胺受体基因Pxtar1,并在293T细胞中利用慢病毒进行了该基因的稳定表达,功能实验也显示酪胺可以激活PxTAR1受体,此外,作者还调查了Pxtar1在小菜蛾体内的表达模式。

使用技术:过表达慢病毒载体构建检测、慢病毒包装技术服务、稳转细胞株构建实验


1637896170298984.png  He S.L. et al: FAM3B promotes progression of oesophageal carcinoma via regulating the AKT–MDM2–p53 signalling axis and the epithelial‐mesenchymal transition. J Cell Mol Med. 2019, IF=5.31.

【研究内容】:本研究发现FAM3B在人食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中高表达,且与患者不良预后有相关性。慢病毒介导的FAM3B过表达抑制ESCC细胞凋亡,促进ESCC细胞迁移和侵袭。进一步研究证实,FAM3B调节AKT-MDM2-p53通路和EMT的两个核心标记物Snail和E-钙粘蛋白。这些发现提示FAM3B可能是ESCC的一个有希望的分子靶点和诊断标记物。

使用技术:慢病毒载体构建技术、慢病毒包装外包服务、稳转细胞株构建实验



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  He L.F. et al: FEN1 promotes tumor progression and confers cisplatin resistance in non-small-cell lung cancer. Molecular Oncology. 2017, IF=6.603.

【研究内容】:作者发现FEN1在肺癌细胞中高表达,在维持基因组稳定性方面发挥重要作用。慢病毒介导的基因表达实验发现,FEN1对肺癌细胞增殖来说很关键,抑制FEN1会导致DNA复制能力下降和DNA损伤积累,最终引发凋亡。FEN1水平改变还会影响肺癌细胞对化疗药物的响应。小鼠实验也表明FEN1抑制剂的使用能够阻碍肺癌发展。因此,该研究指出FEN1的有效利用可能会为肺癌靶向治疗提供帮助。

使用技术:慢病毒载体构建、慢病毒包装


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  Sun H. et al: The FEN1 L209P mutation interferes with long-patch base excision repair and induces cellular transformation. Oncogene. 2016, IF=9.867

【研究内容】:FEN1是一种含特殊结构的核酸酶,对维持人基因组的稳定性中有重要作用。本研究发现了与直肠癌相关的新FEN1突变,L209P。该突变缺乏FEN1的侧翼内切酶活性、外切酶活性及缺口内切酶活性,但保留了DNA结合特性。体内和体外的基因表达实验表明,L209P突变能干扰野生型FEN1的功能,且对基因损伤更敏感,从而导致细胞内基因组的不稳定和细胞转化。

使用技术:慢病毒载体构建技术、慢病毒包装实验、稳转细胞株构建实验检测


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