慢病毒包装实验原理

慢病毒（Lentivirus）是以人类免疫缺陷型病毒（HIV）为基础发展起来的基因工具，已剔除毒性基因，属于假型病毒，安全性高；它能同时感染分裂细胞和非分裂细胞，可将携带的外源基因整合到细胞基因组中实现基因的高效表达。

慢病毒包装系统由三部分组成：

1. 含有外源基因片段、外源基因的启动子，以及其它病毒包装、整合所需的顺式作用元件，如HIV-1 的5’LTR 和 3’LTR以及其他辅助元件等。

2. 包装质粒：共2或3个，分别表达产生病毒包装所必需的蛋白质（反式作用元件）。

3. 包装细胞：293T 细胞株，能够在慢病毒载体和包装质粒mix 共转染后包装出慢病毒。

携带外源基因的慢病毒载体与包装质粒共转染293T包装细胞，一段时间后收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，经浓缩和纯化的慢病毒液可以用于感染宿主细胞或活体动物。

慢病毒包装实验服务流程

慢病毒包装实验流程

慢病毒包装技术优势

① 慢病毒为整合型病毒，可实现外源基因或shRNA、miRNA稳定、持久的表达，更适合于基因功能研究

② 更高的转导效率，可以高效的表达外源基因。

③ 慢病毒感染率高，适用范围广（可感染分裂细胞和非分裂细胞），特别适合于质粒转染效率低的细胞。

④ 包装流程简便，可以一次性获得大量病毒且滴度高。

慢病毒包装服务信息

辉骏生物提供的慢病毒包装服务主要分为以下三种：

慢病毒包装服务
服务项目	服务内容	结果交付	实验周期	客户提供
表达慢病毒包装	表达慢病毒包装	载体质粒、甘油菌、测序结果和报告	2-3周	实验信息表（相关基因信息、载体要求、病毒量要求）
	包装基因表达慢病毒	基因表达慢病毒液和对照慢病毒液	3-4周
	检测慢病毒滴度	滴度检测报告	3-4周
shRNA慢病毒包装	采用客户提供的shRNA或siRNA序列构建shRNA慢病毒载体	载体质粒、甘油菌、测序结果和报告	2周	实验信息表（相关基因信息、载体要求、病毒量要求）
	包装shRNA慢病毒	shRNA慢病毒液和对照慢病毒液	3-4周
	检测慢病毒滴度	滴度检测报告	3-4周
3+1 shRNA慢病毒包装	针对基因序列设计并构建3个shRNA慢病毒载体	载体质粒、甘油菌、测序结果和报告	2-3周	实验信息表（相关基因信息、载体要求、病毒量要求）
	shRNA质粒转染293T细胞进行干扰效率检测	干扰效率检测结果和报告	2周
	干扰效率最高的shRNA质粒包装慢病毒	shRNA慢病毒液和对照慢病毒液	3-4周
	检测慢病毒滴度	滴度检测报告	3-4周

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慢病毒包装结果示例

慢病毒包装滴度检测图

**慢病毒包装实验服务*辉骏优势**

十年服务经验，客户成果发表在NatureMethods，Oncogene，Cell Research等高水平期刊上。

自有分子及细胞生物实验平台，能有效制定并执行最优的实验路线。

售后技术支持将一直保持到客户发表文章，确保客户安心进行下游实验及投稿。

慢病毒包装实验服务-客户文章

Yang T. et al: CD151 promotes Colorectal Cancer progression by a crosstalk involving CEACAM6, LGR5 and Wnt signaling via TGFβ1. Int J Biol Sci. 2021, IF 6.58.

【研究内容】：研发发现CD151在结直肠癌(colorectal cancer, CRC)组织中表达较高，能促进癌细胞增殖、迁移和侵袭。RNA-seq和CoIP-MS实验同时检测和筛选了受CD151表达影响且与CD151相互作用的蛋白质，发现了3个蛋白——TGFβ1，CEACAM6和LGR5。pull down和免疫荧光实验确定了它们间的相互作用。基因沉默和回复实验进一步表明，CD151可能通过TGFβ1来促进CEACAM6、LGR5和Wnt通路。

使用技术：shRNA慢病毒载体构建、慢病毒包装、稳转细胞株构建

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Wu M.H. et al: MafF Is Regulated via the circ-ITCH/miR-224-5p Axis and Acts as a Tumor Suppressor in Hepatocellular Carcinoma. Oncol Res. 2020, IF=5.574.

【研究内容】：本研究发现肝癌组织和细胞中MafF（一种转录因子）的表达较低。慢病毒介导的MafF过表达抑制HCC细胞增殖并诱导细胞凋亡。生物信息学分析和荧光素酶实验确定了MafF是miR-224-5p的直接靶点。RNA pull down实验表明，circ-ITCH可作为miR-224-5p海绵发挥作用。基因表达/回复实验进一步阐明，MafF的表达和抗肿瘤作用可通过circ-ITCH/miR-224-5p轴调节。本研究证实了MafF在HCC中的抑癌作用，揭示了MafF的上游调控机制，为HCC的潜在治疗靶点提供了新的视角。

使用技术：过表达慢病毒载体构建、慢病毒包装、稳转细胞株构建

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Ma H.H. et al: Pharmacological Properties of the Type 1 Tyramine Receptor in the Diamondback Moth, Plutella xylostella. Int J Mol Sci. 2019, IF=5.923.

【研究内容】：酪胺受体（TAR）可被酪胺（TA）或章鱼胺（OA）激活，并已被证明与多种昆虫的生理调节（如味觉反应、社会组织和学习行为）有关。作者在小菜蛾中新克隆得到一个酪胺受体基因Pxtar1，并在293T细胞中利用慢病毒进行了该基因的稳定表达，功能实验也显示酪胺可以激活PxTAR1受体，此外，作者还调查了Pxtar1在小菜蛾体内的表达模式。

使用技术：过表达慢病毒载体构建检测、慢病毒包装技术服务、稳转细胞株构建实验

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He S.L. et al: FAM3B promotes progression of oesophageal carcinoma via regulating the AKT–MDM2–p53 signalling axis and the epithelial‐mesenchymal transition. J Cell Mol Med. 2019, IF=5.31.

【研究内容】：本研究发现FAM3B在人食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中高表达，且与患者不良预后有相关性。慢病毒介导的FAM3B过表达抑制ESCC细胞凋亡，促进ESCC细胞迁移和侵袭。进一步研究证实，FAM3B调节AKT-MDM2-p53通路和EMT的两个核心标记物Snail和E-钙粘蛋白。这些发现提示FAM3B可能是ESCC的一个有希望的分子靶点和诊断标记物。

使用技术：慢病毒载体构建技术、慢病毒包装外包服务、稳转细胞株构建实验

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He L.F. et al: FEN1 promotes tumor progression and confers cisplatin resistance in non-small-cell lung cancer. Molecular Oncology. 2017, IF=6.603.

【研究内容】：作者发现FEN1在肺癌细胞中高表达，在维持基因组稳定性方面发挥重要作用。慢病毒介导的基因表达实验发现，FEN1对肺癌细胞增殖来说很关键，抑制FEN1会导致DNA复制能力下降和DNA损伤积累，最终引发凋亡。FEN1水平改变还会影响肺癌细胞对化疗药物的响应。小鼠实验也表明FEN1抑制剂的使用能够阻碍肺癌发展。因此，该研究指出FEN1的有效利用可能会为肺癌靶向治疗提供帮助。

使用技术：慢病毒载体构建、慢病毒包装

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Sun H. et al: The FEN1 L209P mutation interferes with long-patch base excision repair and induces cellular transformation. Oncogene. 2016, IF=9.867

【研究内容】：FEN1是一种含特殊结构的核酸酶，对维持人基因组的稳定性中有重要作用。本研究发现了与直肠癌相关的新FEN1突变，L209P。该突变缺乏FEN1的侧翼内切酶活性、外切酶活性及缺口内切酶活性，但保留了DNA结合特性。体内和体外的基因表达实验表明，L209P突变能干扰野生型FEN1的功能，且对基因损伤更敏感，从而导致细胞内基因组的不稳定和细胞转化。

使用技术：慢病毒载体构建技术、慢病毒包装实验、稳转细胞株构建实验检测

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