分子生物学是一个生物学领域,涉及基因转录产生 RNA、RNA 翻译成蛋白质以及这些蛋白质在细胞功能中所起的作用的过程。 自 1960 年左右以来,分子生物学家已经开发出方法来识别、分离和操纵细胞中的分子成分,包括 DNA、RNA 和蛋白质。
下面描述了分子生物学领域中使用的几种技术。
1.聚合酶链式反应 (PCR) – 这是分子生物学中最重要的技术之一,主要用于复制 DNA。PCR 允许将单个 DNA 序列扩增成数百万个 DNA 分子。 PCR 还可用于在 DNA 中引入突变或引入特殊的限制酶位点。 此外,PCR用于确定某个DNA片段是否存在于cDNA文库中。不同类型的 PCR 包括用于扩增 RNA 的逆转录 PCR (RT-PCR) 和用于测量存在的 RNA 或 DNA 量的定量 PCR (QPCR)。
2.表达克隆——这种技术有助于科学家了解蛋白质的功能。使用 PCR 将编码特定蛋白质的 DNA 克隆或复制到称为质粒的表达载体中。将质粒引入动物细胞或细菌细胞。 该质粒具有可刺激所需蛋白质高表达的启动子元件,因此可以检查其酶活性。
3.凝胶电泳——这是分子生物学中使用的另一种重要技术,通过在 DNA 穿过琼脂糖凝胶时施加电场,根据它们的大小分离 DNA、RNA 和蛋白质。
4.大分子印迹和探测——Southern印迹、Northern印迹、Western印迹和Eastern印迹等过程用于将DNA或RNA蛋白转移到印迹膜上(通常在凝胶电泳之后),以便对其进行染色或放射性标记,然后进行可视化。
5.阵列 – DNA 微阵列或 DNA 芯片是安装在固体表面(如显微镜载玻片)上的 DNA 斑点的集合,可用于同时量化大量基因的蛋白质表达水平。该技术还可用于对各种不同的基因组区域进行基因分型。
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