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ChIP-Seq分析:组蛋白修饰

染色质免疫沉淀测序 (ChIP-Seq) 是一种强大的工具,使研究人员能够研究和了解蛋白质-DNA 相互作用以及它们对基因表达和细胞功能的影响。



ChIP-Seq 分析结合染色质免疫沉淀 (ChIP) 测定和下一代测序 (Seq) 来识别整个基因组中转录因子和其他蛋白质的 DNA 结合位点。 该技术为研究人员提供了对健康状态和各种疾病中发生的基因调控事件的深入了解。



组蛋白

组蛋白是小而简单的蛋白质,通常存在于细胞核中,将 DNA 链组织成核小体。这些核小体中发生的任何变化都被认为与细胞分裂和转录过程中染色质状态和功能的改变有关。



组蛋白修饰

组蛋白经历了广泛的翻译后修饰, 这些主要发生在从核小体表面延伸的组蛋白的氨基末端尾部,至少有两种机制被认为可以解释这些修饰如何介导染色体的功能。


首先是修饰改变了组蛋白的静电荷,导致其结构变化或改变了它与 DNA 的结合方式。  第二个表明这些修饰创造了蛋白质识别模块可以结合的位点。  组蛋白修饰提供了一种表观遗传机制,可以调节一系列重要的健康和疾病相关过程。


表观遗传修饰是调节基因表达 和基因组功能的关键因素, 在各种类型的表观遗传修饰中,组蛋白修饰对于想要了解不同类型细胞、细胞阶段和细胞环境中表观遗传和基因表达调控的研究人员具有重要意义。


组蛋白翻译后修饰会影响许多基于染色质的反应,而那些影响基因表达的反应尤其重要,因为它们会影响整个转录程序。 中,翻译后修饰的代谢异常与基因表达的错误调节有关体外研究,它们还与人类疾病有关,包括癌症和免疫缺陷疾病。  因此,组蛋白标记的调节及其对修饰特异性结合蛋白关联的影响是一个持续关注的领域。


确定组蛋白修饰的作用通常涉及分析修饰的丰度及其相互作用的结合伙伴。



组蛋白修饰的ChIP-Seq鉴定

ChIP-Seq 已成为一种稳健、常规和全面的技术,用于研究和测量整个基因组中的各种翻译后组蛋白修饰。 这些修饰,包括甲基化、 乙酰化 、磷酸化和泛素化,都是基因组功能和保持其完整性的关键。


它们有助于沉默转座因子,并在发育过程中调节某些基因。  不正确的修饰位置可能导致不健康的细胞表型,包括在衰老过程中看到的那些,在癌症的情况下以及对具有挑战性的营养或环境状态的反应。


ChIP-Seq 分析中的一种常见方法是获取实验样本(疾病样本)和参考样本(健康样本)的 ChIP-Seq 配置文件,并比较它们以识别组蛋白修饰模式的差异。  然后这些可用于建立参与发育或疾病中发生的各种过程的基因或调节机制。



辉骏生物提供的ChIP染色质免疫共沉淀服务分为以下两种:

1. ChIP qPCR,用于检测某样本中的诱饵蛋白和待测DNA片段是否结合;

2. ChIP seq,用于筛选某样本中的诱饵蛋白可以结合哪些DNA区域。


ChIP(染色质免疫共沉淀)检测服务
服务项目
服务内容结果交付实验周期客户提价格
ChIP qPCR
Western blot检测样本(input)中的诱饵蛋白Western blot检测图5-6周

实验样本

诱饵蛋白的IP级抗体

实验信息表(样本信息,诱饵蛋白及待测DNA序列)



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ChIP调取诱饵蛋白及其结合的DNA片段

(2组:实验组和对照组)
ChIP实验报告
Western blot检测ChIP产物中的诱饵蛋白Western blot检测图
qPCR检测ChIP产物中的待测DNA片段
qPCR检测数据
ChIP seqWestern blot检测样本(input)中的诱饵蛋白Western blot检测图5-6周

实验样本

诱饵蛋白的IP级抗体

实验信息表(样本信息,诱饵蛋白序列)



点击询价



ChIP调取诱饵蛋白及其结合的DNA片段

(2组:实验组和对照组)
ChIP实验报告
Western blot检测ChIP产物中的诱饵蛋白Western blot检测图
seq检测ChIP产物中的DNA片段并分析
seq检测结果、检测和分析报告9周



ChIP服务优势*辉骏生物


1

近十年服务经验,服务案例众多,客户发文Nature Cell Biology等高质量期刊

2

可对围绕DNA结合蛋白开展的整体课题提供全方位方案建议

3

自有分子及细胞生物实验平台,能有效制定并执行最优的实验路线

4

售后技术支持将一直保持到客户发表文章,确保客户安心进行下游实验及投稿




ChIP实验-客户发表文献

1.Zhuang Q. et al: NCoR/SMRT co-repressors cooperate with c-MYC to create an epigenetic barrier to somatic cell reprogramming. Nature Cell Biology.2018,IF=17.728.
【研究内容】:客户通过RNA-seq证明了NCoR/SMRT共抑制子与多能位点结合,IP实验、ChIP-qPCR分析进一步表明,NCoR/SMRT-HDAC3复合物在OSKM重编程中诱导组蛋白去乙酰化的多能位点。ChIP-seq分析发现,NCoR/SMRT中还存在着一个c-MYC结合基序。研究揭示了NCoR/SMRT共抑制子在重编程中的作用,并提出了c-MYC在这一过程中的双重功能。
使用相关技术:染色质免疫共沉淀ChIP、chip qpcr实验


2.Wang R.H. et al: A requirement for breast-cancer-associated gene 1(BRCA1) in the spindle checkpoint. PANS. 2004,IF=9.58.
【研究内容】:研究表明BRCA1缺陷型细胞的有丝分裂受到影响,存在纺锤体检查点缺陷。客户检测和纺锤体检查点密切相关的几个基因,发现BRCA1缺陷型Mad2基因表达水平变化明显,由此推测BRCA1是通过影响Mad2的表达,从而影响有丝分裂的。DNA pulldown及ChIP-qPCR实验证实了BRCA1可以和Mad2启动子结合,进一步研究发现BRCA1确实上调Mad2从而影响有丝分裂。
使用相关技术:chip技术服务、染色质免疫共沉淀ChIP-seq



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