抗体是免疫系统的重要组成部分; 对抗感染和疾病以保护身体。 研究此类蛋白质的基因组成在几种不同的应用中非常重要,包括抗体工程、数据库、功能优化和新抗体克隆的发现。
可以用称为杂交瘤技术的方法对单克隆抗体进行工程改造和选择。 最初宿主动物被引入抗原 ,导致特定 B 细胞的产生。 几周后,脾细胞被移除并与骨髓瘤细胞融合。
融合的细胞是永生的,经过几周的孵化,它们最终会产生抗体。 然而,一旦获得这些抗体,就需要对其进行筛选以确保特异性。 该筛选过程可以通过几种测序技术进行,如下所述。
用于鉴定的早期方法核酸抗体序列 之一是 Sanger 测序的小规模方法。 在 Sanger测序中,样本 DNA 被分成四个小瓶,其中包含所有四种脱氧核苷酸和DNA聚合酶。
随着 DNA
在每个小瓶中转录,然后添加修饰的标记二脱氧核苷三磷酸 (ddNTP),终止 DNA 延伸。 每个小瓶接收不同的 ddNTP,该 ddNTP会停止对不同核苷酸的测序。 然后可以通过电泳分离产生的片段,最终可以通过每个条带的相对位置来识别 DNA 的序列。
该方法已用于抗体研究等多个行业,并已于 2003 年在人类基因组计划中用于对第一个人类基因组进行测序。但是,该方法受到限制,因为它非常慢,需要大量的人工工作并且容易出错。 因此,已经开发了现代方法来提高测序的通量和可靠性。
新一代测序技术是鉴定 DNA 核酸序列的现代方法。使用荧光标记的 dNTP 可以更快地获得结果,同时对数千个片段进行测序。涉及四个主要阶段:
●文库制备 :DNA 样本被片段化,并在每一端添加接头。
●簇扩增 :片段与流动槽表面杂交并倍增。
●测序 :将 试剂 添加到样品中,然后开始测序。当荧光标记的抗体被掺入时,它们会释放特定波长的发射。
●分析 :通过生物信息学软件从获得的数据中推断出DNA的序列。
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