Western Blot实验过时了吗？蛋白免疫印迹法（WB）有何优势？

自1979年Towbin等人首次提出以来，蛋白质免疫印迹（WB）被广泛应用于检测混合物中特定蛋白质的存在、评价目标蛋白质的大小和测量蛋白质表达水平。WB的过程包括使蛋白质混合物变性并基于分子量通过凝胶电泳分离它们，将分离的条带转移到印迹膜上，在封闭膜的剩余表面之后，用一抗识别感兴趣的蛋白质并通过二抗检测。

Western Blot实验可以是在蛋白质表达期间测试细胞裂解物的快速和肮脏的方式，以查看感兴趣的蛋白质是否表达以及表达水平是什么样子。重要的是在纯化前检查来自用于杆状病毒生产的P2扩增的沉淀或大肠杆菌表达沉淀。此外，如果SDS-PAGE的污染物条带是非特异性残留或产物降解，则可以从WB容易地获得杂质信息，例如蛋白质污染物的水平。此外，当抗体是用于表达的目标蛋白质时，WB可以证明具有适当分子量的重链和轻链的功能性表达，并且它们正确配对。

蛋白质印迹western blot技术被认为是许多情况下必不可少的QC。例如，在体外测定中使用的蛋白质，其中通过抗体标记或蛋白质本身进行检测，WB验证是关键的。对于提交给监管机构和同行评审期刊评审员的ELISA数据，WB也被广泛接受为确认所用蛋白质正确的最小确认QC步骤。

WB技术实验的局限性在于其重现性差且易于用于定量目的的错误。一抗特异性检测目的蛋白是关键。应用WB有时受到缺乏针对蛋白质而不是标签的完全验证的抗体的限制。根据所用的表达系统（E.大肠杆菌、芽孢杆菌、HEK293、CHO等），但在一些情况下，可能存在其它蛋白质与表达中使用的标签的非特异性结合，因此需要对表达系统“背景噪声”进行彻底表征。具有高分子量的蛋白质在凝胶上的分辨较差，使得更难以进行WB。因此，需要另外的蛋白质QC和表征方法以获得关于蛋白质纯化和鉴定的更多信息。