中文标题：癌症易感性候选物9的沉默抑制胃癌并逆转化学抗性

发表期刊：Oncotarget

影响因子：5.168

发表时间：2017年1月

合作单位：中国医科大学基础医学院神经生物学教研室

运用技术：载体构建（由辉骏生物提供技术支持）

● 研究背景

胃癌(GC)作为最常见的实体恶性肿瘤之一，由于其局部晚期转移和复发频率较高，预后较差。化疗耐药可能是化疗后复发的原因之一，因此了解化疗耐药的潜在机制，寻找新的治疗靶点，进一步改善胃癌的预后是至关重要的。长非编码RNA(LncRNA)是一种不能翻译成蛋白质的内源性RNA，它可以作为许多基因的转录调节因子，参与癌症增殖、侵袭和化疗耐药的关键步骤。癌易感候选物9(CASC9)基因位于8q21.11，编码一个lncRNA。该基因在食管鳞状细胞癌(ESCC)中被证实可调节癌细胞的迁移和侵袭。通过基因芯片检测，研究者发现CASC9在胃癌组织中的表达是正常胃组织的近8倍，这一观察结果促使研究者进一步研究其在细胞增殖、侵袭和化疗耐药中的作用。

● 研究结果

1.     CASC9在胃癌组织和细胞系中表达上调

首先，研究者对5例胃癌(GC)和配对正常胃组织(NST)中的CASC9的表达进行了微阵列分析。结果显示，GC组中CASC9的表达几乎是NST组中的8倍(图1A)。QRT-PCR进一步证实了这一结果，与对照组NST相比，CASC9在89例胃癌组织中的表达显著增高(图1B)。CASC9在胃癌细胞系BGC823和SGC7901细胞中的表达明显高于正常胃上皮细胞(图1B)。研究者还进一步分析了CASC9表达与胃癌临床病理特征的关系。结果显示，CASC9的表达水平与肿瘤大小、浸润深度和淋巴结转移数有关，在Borrmann3型、4型、低分化、干扰素γ浸润型的肿瘤中，CASC9的表达水平明显高于Borrman1型、2型、高、中分化、干扰素α/β浸润型的肿瘤，表明CASC9可能在胃癌的发生、发展和转移中起一定作用。

图1

2. CASC9在胃癌耐药细胞系中表达上调

紫杉醇对BGC823/DR和SGC7901/DR细胞的IC50值分别为183.33±0.4 1μg/L和146.54±0.5 7μg/L，明显高于BGC82 3和SGC790 1细胞。阿霉素对BGC823/DR和SGC7901/DR细胞的IC50值分别为7.2 6±0.2 1μg/mL和5.41±0.14μg/mL，明显高于BGC823和SGC7901细胞。CASC9在耐药的BGC823/DR和SGC7901/DR细胞中的表达明显增高(图1B)，这表明CASC9的过度表达与胃癌的化疗耐药有关。

3. CASC9基因敲除抑制耐药胃癌细胞的生长和侵袭

为了评估CASC9是否会影响耐药GC细胞的生长和侵袭，研究者建立了稳定表达CASC9沉默载体的细胞，并通过qRT-PCR确认敲低情况（图2A）。如图2B和2C所示，CASC9敲低抑制BGC823/DR和SGC7901/DR细胞的细胞生长。流式细胞分析结果显示，CASC9敲低与细胞凋亡显著增加相关（图2D）。细胞侵袭实验结果也表明，CASC9敲低也阻碍了BGC823/DR和SGC7901/DR细胞中的细胞侵袭（图2E，F）。

图2

4. CASC9基因敲除抑制耐药GC细胞的化疗耐药性

在BGC82 3/DR和SGC790 1/DR细胞中，CASC9基因敲除使其对紫杉醇恢复敏感：IC50值分别从183.33±0.41μg/L和146.54±0.57μg/L降至72.31±0.28μg/L和58.62±0.32μg/L（图3A）。类似地，CASC9基因敲除也使细胞恢复对阿霉素的敏感性，IC50分别从7.26±0.21μg/mL和5.41±0.14μg/mL降至4.17±0.19μg/mL和2.28±0.16μg/mL（图3B）。

图3

5. CASC9基因敲除与耐药GC细胞MDR1下调相关

微阵列分析的初步结果显示，CASC9和MDR1之间存在正相关。研究者使用Western blot方法检测了CASC9基因敲除前后BGC823/DR和SGC7901/DR细胞中MDR1的表达水平。结果表明，CASC9基因敲除与MDR1表达降低有关(图3C)。