成功培养原代啮齿动物神经元的7个技巧

原代神经元培养物是研究细胞功能、蛋白质相互作用和神经毒性的有力工具，并有助于许多其他体外应用。培养神经元的一些最大挫折可能是获得低细胞产量和管理细胞死亡。优化你的神经元准备工作流程也可能既费时又费钱。辉骏生物的蛋白质技术人员在下文提供七个技巧，或许能帮助提高你的初级神经元培养物的完整性。

1. 创建具有理想基材的矩阵

2. 使用胚胎组织

3. 充分分离你的组织

4. 确保使用含有正确补充剂的无血清培养基

5. 了解适合你实验的密度

6. 快速工作

7. 让你的文化适应新环境

图：神经元准备的一般工作流程

1. 创建具有理想基材的矩阵

神经元与塑料或玻璃的单层附着需要细胞外基质成分和其他粘附因子，尤其是由于它们的无血清环境。为了确保你的神经元在培养物中正确粘附、分化和生长，请务必在电镀细胞之前用一种或多种底物覆盖你的平板。神经元培养最常用的底物是多聚-D-赖氨酸、多聚-L-赖氨酸、多聚-L-鸟氨酸、纤连蛋白、胶原蛋白和层粘连蛋白。通常，最常使用多聚-D-赖氨酸和多聚-L-赖氨酸。重要的是要注意，当使用聚 L-赖氨酸时，选择更高的分子量 (>MW 30,000–70,000)，因为较短的聚合物可能对你的细胞有毒。此外，确保孔的整个底部都被底物覆盖，以避免细胞生长不均匀和结块。在电镀神经元之前，彻底清洗所有多余的底物，因为残留的底物可能对神经元有毒。

2. 使用胚胎组织

最好使用胚胎动物来培养神经元。产前动物的大脑 (E16-E18) 的神经元具有较少广泛的过程和连接，使细胞在解离过程中不易受到损伤。此外，产前大脑拥有许多未分化的细胞。当在适当的培养基中培养时，这些细胞比已经分化的细胞更容易分化成神经元。相比之下，较老的脑组织的异质性可能会用其他细胞类型（如星形胶质细胞和少突胶质细胞）污染培养物。

3. 充分分离组织

使用酶解、化学解离和机械解离的组合正确解离神经组织非常重要。如果组织没有正确解离，可能会发生细胞聚集，使神经元难以在培养中形成正确的连接。我们建议在解剖后将神经组织进一步切成小块，以帮助分离。此外，请考虑你用于解离的酶。例如，胶原酶比胰蛋白酶更温和，在解离步骤中可能需要更多时间。

4. 确保使用含有正确补充剂的无血清培养基

在你的培养基中添加血清会导致你的细胞不正常分化，主要是星形胶质细胞。用于培养神经元的适当培养基和补充剂是市售的。为了避免细菌污染的风险，请务必在培养基中加入适当的抗生素，例如青霉素-链霉素-谷氨酰胺混合物。此外，当最初对神经元进行电镀时，培养基中的少量 L-谷氨酸 (~0.025mM) 可以帮助神经元生长和连接。然而，为了避免细胞毒性，重要的是要了解培养基中的 L-谷氨酸浓度和培养暴露的持续时间。最后，为了长时间保持健康的培养，我们建议每三天用新培养基更换一半的培养基。

5. 了解适合你实验的密度

以理想的密度电镀神经元细胞对于培养的整体健康很重要。电镀细胞过于密集或过于稀疏都会导致细胞聚集，仅在电镀几天后就会在培养物中产生球状体。约 1,000–5,000 个细胞的密度铺板 2 。你的文化的理想密度取决于你的实验问题。例如，在尝试对单个细胞进行成像时，较低的密度是理想的，但在尝试对低表达蛋白质进行蛋白质印迹时，可能需要较高的密度。