如果您要进行定量PCR（qPCR），那么了解Ct值。下面 我们将带您了解它在qPCR中的关键作用。

一、在深入解释Ct值是什么之前，我们想花一点时间强调一下，多年来该值已被赋予多个名称，包括：

1.Ct–循环阈值

2.Cp–交点

3.TOP-分支点

4.Cq–定量循环

这几个名字表达的都是一个意思。由于实时定量qPCR实验指南建议使用Cq值来命名该值，因此，接下来的内容，我们将统一使用Cq值来表示。

 二、Cq值的定义  

实时荧光定量PCR 是将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后，完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断，荧光素游离于反应体系中，在特定光激发下发出荧光，随着循环次数的增加，被扩增的目的基因片段呈指数规律增长，通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度，求得Ct值，同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照，即可得出待测标本目的基因的拷贝数。

1.阈值：

以 PCR 反应的前 15 个循环的荧光信号作为荧光本底信号，一般荧光域值定义为 3~15 个循环的荧光信号的标准偏差的 10 倍。

2.CT值：

也称循环阈值，C代表Cycle，t代表threshold。其含义是:在PCR 循环过程中，荧光信号开始由本底进入指数增长阶段的拐点所对应的循环次数。

三、常见问题

1.预混液

Cq值会随着荧光发射的变化而变化，而荧光发射受溶液中pH值和盐浓度的影响，因此，请确保仅使用高质量的PCR组件，如使用自制溶液，每次实验前要检查pH值和盐沉淀监测。

2.被动参比染料

反应值是FAM荧光染料与ROX参比染料的比值。假设FAM荧光不变，ROX的用量越少，反应值越高。

3.模板太少–尝试使用更多模板。

参考文献

1.Bustin SA, et al. The MIQE guidelines: minimum information for publication of quantitative real-time PCR experiments. Clin Chem. 2009. 55(4):611-22. doi: 10.1373/clinchem.2008.112797.

2.C. Schrader, et al. PCR inhibitors – occurrence, properties and removal. J Applied Microbiology. 113(5):1014-26. doi: 10.1111/j.1365-2672.2012.05384.x.