蛋白质测序主要是依靠化学或酶消化的方法来分离多肽并检测氨基酸残基的数量和组成，这篇文章将介绍蛋白质测序的原理和实验步骤。

目前，所谓的蛋白质测序是指检测蛋白质的一级结构，其包含蛋白质中多肽链的数量。多肽和蛋白质可在许多情况下同等使用。多肽的氨基酸序列是蛋白质的生物学功能。

联系技术支持详谈蛋白测序实验

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测序步骤

1. 分裂多肽链

蛋白质分子必须经过分离纯化。几种多肽通过非共价键结合在一起，称为寡聚蛋白。比如用8 mol/L尿素或6 mol/ L盐酸胍处理四聚体-血红蛋白和二聚体-烯醇化酶。

2. 蛋白质分子中多肽数目的检测

多肽的数目可通过检测氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系来确定。

3. 断裂二硫键

几条多肽链通过二硫键连接。在8 mol/ L尿素或6 mol/ L盐酸胍条件下，过量的[β]巯基乙醇将二硫键还原为硫醇。然后用烷基试剂保护，防止再氧化。

裂解和保护二硫键
A. 过甲酸：-CH2SO3H
B. 还原+氧化：巯基乙醇，DTT +碘乙酸，-S-CH 2-COOH
C. 亚硫酸分解：-R1-S-S-R2 + HSO3-，R1-S- + R2-S-SOH3

4. 检测多肽链的氨基酸组成并计算氨基酸组成的分子比

5. 多肽链的N-末端和C-末端测序

多肽的氨基酸分为两类：氨基末端和羧基末端。在肽链氨基酸序列分析中，N端比C端更为重要。

6. 多肽可以被切割成几个小肽。可以使用两种以上的方法将肽样品断裂成两组或更多组肽或肽片段，然后将它们分离。

7. 确定每种肽的氨基酸测序

8. 测定多肽链中肽段的序列

9. 确定原始多肽链中二硫键的位置

通常，胃蛋白酶将用于处理具有二硫键的那些多肽链。然后用二维电泳技术分离每个肽段。分析可能含有二硫键的肽段的组成和序列。然后将其与其它方法分析的肽片段进行比较，确定二硫键的位置。

蛋白测序实验外包服务

辉骏生物基于高精度、高分辨率质谱设备，结合自主研发的测序技术平台，能够实现对目标蛋白氨基酸序列的精准解读。该技术可以用于解析任何纯蛋白样本，比如工具酶、突变蛋白、单克隆抗体等。

广州辉骏生物科技股份有限公司成立于2011年，位于广州市科学城，是一家由在生物医药领域具有资深科研资历人才组建的创新型科技企业，致力于为生物医药行业、体外诊断行业、高校科研机构提供高品质的蛋白测序技术服务。 

蛋白质测序技术服务流程—辉骏生物

1

客户提供纯蛋白样本

2

样本质检（SDS-PAGE）

3

质谱检测，确定模板序列（1周完成）

4

蛋白从头测序（2-3周完成）

5

序列确认，出具测序报告（1周完成）

蛋白质测序技术服务客户案例