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TMT标记定量实验原理及实验流程是怎样的?

TMT实验原理

Tandem Mass Tag™ (TMT™) 是由美国Thermo公司研发的体外同重同位素标记的定量技术的专利产品,用于标记不同的蛋白样品并同时进行高通量的 LC-MS/MS 的定量研究 。目前有 2-、6-、10- 等 3种通量类型,可分别平行处理 2个、6个和 10个样品,显著提高了蛋白样品质谱检测的通量,减少所需质谱机时;此外,由于采用了稳定同位素标记不同样品,在标记实验之后所有样品混合成一个进行后续处理,大大降低了实验误差,使得定量准确性显著提高。


TMT同位素试剂标记多肽氨基基团后,等量混匀多肽并进行LC-MS/MS分析。一级质谱中,不同样品来源的同一肽段表现出相同的m/Z;二级质谱中,化学键断裂释放出报告离子,低质量区的报告离子强度反映了该肽段在不同样品中的相对表达量,高质量区的肽段碎片离子m/Z反映了该肽段的序列信息。质谱原始数据经过数据库检索,即可得到样本中所含蛋白及其表达差异。


TMT标记定量实验流程

2-、6-、10-个样品分别提取总蛋白,取等量蛋白进行 Trypsin 酶切,得到相应样品的多肽;分别用不同的 TMT 标签对 2-、6-、10- 个样品进行标记,随后等量混合成一个样品并进行LC-MS/MS 分析和后续的数据库比对,鉴定出样品中含有哪些蛋白以及每个蛋白在样品中相对含量。


辉骏生物TMT实验流程图

图1:辉骏生物TMT标记定量蛋白质组学实验流程图



辉骏生物拥有10多年专业的TMT标记定量蛋白质组学实验技术服务经验,公司自有蛋白质组学平台大大降低TMT蛋白质组学检测价格费用,实验外包数据真实可信,众多客户已在Nature methods、Annals of the rheumatic diseases,Journal of Hematology & Oncology等高水平期刊发表IF>10等优质高分论文!



辉骏生物TMT技术服务优势


1

高通量: 16-plex TMT试剂盒可同时标记最多 16组样本

2

适用范围广:几乎可对任何物种的各类蛋白质进行分离鉴定,不受蛋白大小或酸碱性等因素影响


3

灵敏度高:低丰度蛋白也能检出


4

定量准确:不同标记的肽段等量混合后上机,避免技术误差,提高检测效率





TMT应用领域


基础医学:疾病标志物,发病机制,疾病分型等;

生物医药:药物机理,药效评价,药物开发等;

农林畜渔:抗逆胁迫,生长发育,耐药,致病机理等。



TMT服务信息-辉骏生物


项目名称

客户提供

结果交付

实验周期

价格

iTRAQ/TMT

原始样本(干冰运输,广州地区可上门取样)
样本信息表
分析要求

       

 1、蛋白鉴定及定量结果表
 2、肽段鉴定及定量结果表
 3、差异蛋白结果表
 4、生物信息学分析结果
 5、质谱原始数据
 6、实验报告

5-7周


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生物信息学分析-辉骏生物



TMT标记定量—辉骏生物客户发表文献


1. Li K. et al: Tyrosine kinase Fyn promotes osteoarthritis by activating the β-catenin pathway. Ann Rheum Dis, 0:1–9 (2018,IF=14.299).

2. Global iTRAQ-based proteomic profiling of Toxoplasma gondii oocysts during sporulation. J Proteomics.(2016 , IF=5.168).

3. Comparative Proteomics Analysis of Bacillus amyloliquefaciens SQR9 Revealed the Key Proteins Involved in in Situ Root Colonization. J Proteome Res.(2014 , IF=4.173).

4. Zeng L. et al: Asparagine Synthetase and Filamin A Have Different Roles in Ovarian Cancer. Front Oncol. (2019,IF=4.848).



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