什么是流式细胞术？

流式细胞仪通过将细胞或颗粒分离到狭窄、快速流动的液体流中来检测悬浮液中的细胞或颗粒。样品通过激光，激光可检测大小、颗粒或细胞数量、粒度和荧光等特性。   荧光标记，通常是荧光标记的抗体，通常用于流式细胞术实验，可以提供有关细胞过程的信息，例如，细胞是活的还是死的。

荧光标记的样本连接到流式细胞仪，并通过流体动力学聚焦定向成被快速移动的流体“鞘”包围的细液体流。  一个激光（或多个激光）聚焦在该移动液体流上，检测器瞄准检测前向散射、侧向散射和荧光分子的同一点。  结合来自粒子的荧光，检测器识别散射光。

通过软件检测和分析荧光发射峰处的亮度波动，该软件提供有关粒子特性的数据。  收集样本数据被称为“采集”，使用的软件可以调整参数，例如通道之间的泄漏补偿。  此外，该软件可确保正确设置参数。   流式细胞仪的五个主要组件是流式细胞、测量系统、检测器、放大系统和计算机软件。

什么是蛋白质工程？

蛋白质工程用于合成新的蛋白质，此外，可以修改（工程化）现有蛋白质的序列和结构以实现所需的功能。  蛋白质工程领域已显着受益于分子力场、结构生物信息学的进步以及对蛋白质复杂 3D 结构的了解不断增加。  由于知识和技术的进步，计算方法已经成为可能。

蛋白质工程是一门相对较新的学科，在理解蛋白质折叠和识别以告知蛋白质设计原则方面已经进行了大量研究。  蛋白质工程策略分为两类；  定向进化和合理的蛋白质设计。   这两种方法并不相互排斥，研究人员通常在蛋白质工程中同时应用这两种方法。多蛋白质工程方法包括多序列比对、协同进化分析、多价结合和结构预测。

蛋白质工程基于重组DNA技术。   经典的合理设计方法涉及定点诱变，其中将特定的氨基酸序列插入靶基因。  可以使用位点重叠法或全质粒单轮 PCR 进行定点诱变。   当蛋白质的序列已知时，合理设计是有用的。  然而，在许多情况下，序列是未知的，这促进了对进化方法的需求。

高通量筛选的最新技术进步为该领域的发展提供了机会。  流式细胞术是一种可以提供相关数据的技术，有助于为蛋白质工程研究提供信息。

流式细胞仪如何用于检测蛋白质工程

近年来，流式细胞仪在蛋白质工程中的应用出现了巨大的机遇。 可以对蛋白质进行工程改造，使其具有特定的特性，例如配体结合、变构、催化活性和改进的稳定性。  流式细胞术可以以高通量的方式检测这些工程蛋白的生物标志物，每分钟对数百甚至数千个颗粒进行分类和计数。

含有工程蛋白质的细胞被荧光标记并通过流式细胞仪，在那里它们被软件检测和分析，通常需要多轮筛选才能找到具有目标功能特性的工程蛋白。执行该多步骤过程，直到观察到的蛋白质功能改善可以忽略不计或生成的蛋白质满足所选标准。

有多种方法可以在工程蛋白中产生序列多样性，包括随机诱变、同源体外重组或非同源重组。 无论创建序列多样性的方法如何，进化工程技术的主要障碍是传统筛选过程对蛋白质工程过程中产生的大量蛋白质序列库的限制。

流式细胞术在蛋白质工程方面具有巨大优势，因为它能够快速检测工程细胞中表达的序列，为研究人员提供大量数据，为选择具有感兴趣特性的蛋白质提供信息。蛋白质工程中采用的其他技术包括噬菌体展示、使用报告酶的生物测定和单孔测定。

总结

蛋白质工程是一个相对较新的研究领域，越来越多地用于制造具有各种功能特性的定制蛋白质，用于药物设计等目的。  分析大型工程蛋白质库的需要促进了该领域高通量方法的使用。   流式细胞术就是这样一种技术，已显示出实现这一要求的潜力，可在短时间内提供研究所需的数据。

蛋白组/代谢组实验

❶ iTRAQ 定量蛋白质组学

❷ Label Free 实验检测服务

❸ LC-MS/MS 蛋白质谱鉴定

❹ DIA 全息扫描定量蛋白质
❺ 广泛靶向代谢组学

蛋白/核酸相互作用实验

❶ GST pull down

❷ RNA pull down

❸ DNA pull down

❹ Co-IP 免疫共沉淀

❺ TAP-MS串联亲和纯化

分子细胞生物学实验

❶ 基因调取/合成 (cDNA克隆)

❷ 荧光定量PCR (qPCR)

❸ 载体构建实验服务

❹ miRNA靶基因验证
❺ 慢病毒包装

科研产品

❶ 哺乳动物细胞表达载体

❷ 人cDNA克隆库

❸ 慢病毒表达载体

❹ 慢病毒干扰载体

抗体工程服务

❶ 单克隆抗体测序

❷ 抗体从头测序

❸ 抗体表达服务

❹ 重组抗体表达

实验试剂盒

❶ RNA pull down 试剂盒

❷ GST pull down 试剂盒

❸ COIP 试剂盒

❹ Flag 试剂盒

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