抗体的工业制备需要努力生产稳定的细胞系和商业上可行数量的纯抗体。 这些抗体随后被用于诊断、分子微生物学,甚至用于治疗某些疾病。
体外方法
在体外方法中,使用杂交瘤方法产生抗体,其中杂交瘤细胞是通过融合骨髓瘤细胞和 B 淋巴细胞产生的。 这些淋巴细胞可能来自小鼠或大鼠。 将靶抗原注射给动物,从而使动物针对该抗原进行免疫。 在动物产生抗体后,提取淋巴细胞并与骨髓细胞融合以产生杂交瘤。 该杂交瘤细胞系随后 在体外 。 它们将抗体分泌到培养基中,从中分离和收集它们。
检查污染后,将杂交瘤细胞培养物在滚瓶或搅拌的细胞悬浮培养物中扩增,使其生长至细胞密度为 1-2 X105 个细胞/mL。 将它们进一步培养数周并进行监测以检查它们的生长情况。 然后将杂交瘤细胞以 3000-4000rpm 的速度离心 15 分钟以将它们与培养基分离。 收集抗体,然后送去进一步纯化。 体外 方法可以产生 15–50mg/L 的抗体产量。
体外方法优缺点
体外灵活性,范围从毫克到克。 它具有 > 95% 纯度的抗体,带有痕量的 IgG 污染,并且具有成本效益。 然而,随着抗体产量的增加, 体外 生产的成本可能会上升。 基于细胞系, 体外 生产成本可能比 体内 方法高 0.5 至 6 倍。
体内方法
初始步骤体内类似于体外方法,其中将抗原注射到动物体内,例如小鼠或大鼠。 动物产生抗体后,提取淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合,产生杂交瘤。 中使用的悬浮培养相比,在小鼠或大鼠中扩增克隆的杂交瘤细胞 体外 方法 将大约 1X 106 个杂交瘤细胞注入每只小鼠的腹腔。 这些杂交瘤细胞在小鼠中作为腹水肿瘤扩增 7-10 天,然后收获腹水。 其他细胞和脂质成分通过离心分离以收集抗体。
体内方法优缺点
使用动物 体内 方法导致以简单的方式产生大量抗体。 它还可用于扩增在体外条件下表现不佳的杂交瘤。 然而,这种方法需要足够的动物设施,并且污染率可能很高。 此外,这种方法对动物来说是痛苦的,这可能会引发生物伦理问题。
中空纤维生物反应器
在中空纤维生物反应器中,杂交瘤细胞在隔间中生长,可以连续添加新鲜培养基以减少有毒副产物的积累。 这种方法可以产生高浓度的抗体。
任何一种方法产生的抗体在使用前都必须经过纯化。 此步骤包括离心、过滤和其他分离方法。 在离心过程中,整个细胞和细胞碎片可能会从溶液中分离出来。
随后,它可以通过离子交换色谱柱,在那里可以通过与特定配体结合来分离抗体。 抗体在低离子浓度下沉淀,此原理也可用于分离抗体。 为了根据抗体的大小分离抗体,可以使用电泳。
客户提供 | 实验内容 | 交付 | 周期 |
抗体基因序列 /抗体样品 | 抗体测序(可选) | 1. 抗体 2. 测序报告 3. 质检报告 4. 实验报告 | 2周 |
基因合成&载体构建 | 1-2周 | ||
质粒抽提 | 3-4周 | ||
细胞转染&表达抗体 | |||
抗体纯化 | |||
质检:SDS-PAGE、HPLC&ELISA...... |
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