在COIP实验中,磁珠结块是一个令科研人员颇为头疼的问题,不仅会影响蛋白结合效率,导致实验结果重复性差,还可能使大量时间和精力付诸东流。辉骏生物在本文将深入剖析磁珠结块的原因,并提供切实可行的解决办法与预防技巧,助力您的COIP实验顺利进行。
▲磁珠结块的常见原因
1. 保存不当:磁珠在 4℃环境下放置时间过长且未充分混匀,或者经历反复冻融,都会破坏其表面活性,增加结块风险。
2. 孵育温度失控:当磁珠在室温下放置超过 30 分钟,容易出现抱团现象,进而形成结块。
3. 缓冲液 pH 异常:裂解液的 pH 值偏酸或偏碱,会导致磁珠表面电荷紊乱,促使磁珠相互聚集结块。
★ 快速解决办法
A. 冰浴超声法:将磁珠悬液置于冰上,使用 20% 功率的超声处理 3 秒,间隔 10 秒后重复操作 3 次。操作时需用封口膜密封离心管,防止液体溅出。此方法能有效分散结块,让磁珠恢复良好状态。
B. 梯度混匀法:先以 500rpm 的转速离心 10 秒,使磁珠沉底,再用 1ml 枪头沿着管壁缓慢吹打 30 次,随后用涡旋仪低档震荡 3 秒。全程需在冰上进行,避免温度对磁珠产生影响。
C. 缓冲液调节法:若结块是由缓冲液 pH 问题引起,可补加 50μl 1M Tris-HCl(pH8.0),轻轻混匀后静置 5 分钟,结块会逐渐软化并分散。
● 预防磁珠结块的关键技巧
1) 磁珠从冰箱取出后,先在手心搓 10 秒回温,再涡旋 1 分钟,使磁珠均匀分散。
2) 每次取用磁珠前,必须上下颠倒离心管 50 次,直至肉眼看不到颗粒,确保磁珠充分混匀。
3) 加样后,将样品置于 4℃摇床,以 80rpm 的低速摇晃,避免剧烈震荡对磁珠造成损伤。
在应对磁珠结块问题时,选择一款性能优良的磁珠产品至关重要。辉骏生物的ChainFree®纳米抗体磁珠就是不错的选择,其表面采用特殊纳米涂层处理,电荷分布稳定,能大幅降低结块概率。即便偶尔操作时未及时混匀,也不易形成硬疙瘩,对新手非常友好。
辉骏生物ChainFree® 纳米抗体磁珠在 COIP 实验中表现卓越,磁珠粒径均匀,确保实验结果的均一性与稳定性,能够精准地富集目标蛋白 - 蛋白复合物,减少非特异性结合,让 WB 条带更清晰。同时,在蛋白质纯化领域,可高效分离出高纯度的目标蛋白,满足科研及生物制药等多方面需求。
●Western-Blot结果显示:辉骏生物ChainFree®磁珠对诱饵蛋白的亲和力强,IP效果与sigma产品相当,且远高于同类知名品牌磁珠。
●SDS-PAGE结果显示:辉骏生物ChainFree®磁珠的IP复合物中无抗体轻重链污染,并且同等使用体积时拉取到的诱饵蛋白和互作蛋白量更高,更有利于后续质谱检测需求。
Tips:虽然采用偶联HRP的anti-flag抗体或轻重链特异性二抗做WB实验可以掩盖轻重链干扰问题,但IP复合物中的轻重链污染依旧存在,且会对质谱检测造成影响。
泳道1:转染Flag空载体的HEK-293T细胞裂解液
泳道2:转染Flag-诱饵蛋白的HEK-293T细胞裂解液
泳道3:转染Flag空载体的HEK-293T细胞裂解液采用20 μL ChainFree® Anti-Flag 磁珠IP后的洗脱液
泳道4:转染Flag-诱饵蛋白的HEK-293T细胞裂解液采用20 μL ChainFree® Anti-Flag 磁珠IP后的洗脱液
一抗:Anti-Flag小鼠单克隆抗体1:2500稀释(辉骏产品货号:FI01104)
二抗:羊抗鼠IgG (H+L) :1:8000稀释
预计分子量大小:55 kDa
使用辉骏生物的纳米抗体磁珠,再结合上述的操作技巧,能有效避免磁珠结块,保证实验的顺利进行,让 WB 条带更加清晰干净。此外,我们还提供纳米抗体磁珠试用装,便于新手先进行尝试。
如果您正在为CoIP实验中的磁珠结块问题烦恼,不妨尝试上述方法并选用辉骏生物的ChainFree® 纳米抗体磁珠,相信能为您的实验带来很大帮助。
● ChainFree® Anti-Flag Magnetic Beads(FI8201)
● ChainFree® Anti-HA Magnetic Beads(FI8202)
● ChainFree® Anti-V5 Magnetic Beads(FI8203)
● ChainFree® Anti-Myc Magnetic Beads(FI8204)
● ChainFree® Anti-GFP Magnetic Beads(FI8205)
● ChainFree® Anti-RFP Magnetic Beads(FI8206)
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