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TAP串联亲和纯化试剂盒简介

辉骏生物的TAP串联亲和纯化试剂盒能够高效完成双标签（Flag和TST）融合蛋白的纯化及其互作蛋白的调取。将Flag标签、TST标签与目标蛋白在目的细胞中融合表达，分别采用TST树脂和Flag树脂进行两步串联的亲和纯化，最终获得目标蛋白及其互作蛋白复合物。洗脱的蛋白产物既可以用Western blot检测已知蛋白，也可以用质谱（LC-MS/MS）鉴定未知蛋白。

FLAG-tag 是一段由8个氨基酸残基组成，N-DYKDDDDK-C (1012 Da)，其作用是标记蛋白。在蛋白表达和定位研究中，可以通过基因工程技术手段将所要研究的目的基因和FLAG-tag基因序列连接起来，可以连接在目的蛋白的C端或N端，然后将整合后的基因转入细胞中或胚胎干细胞亦或受精卵中。

TST标签是strep-tagⅡ（Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys）的升级版，由两个strep-tagⅡ外加连接臂组成，与融合蛋白结合能力更强，结合位点更多，其作用是标记蛋白。在蛋白表达和定位研究中，可以通过基因工程技术手段将所要研究的目的基因和TST-tag基因序列连接起来，可以连接在目的蛋白的C端或N端，然后将整合后的基因转入细胞中或胚胎干细胞亦或受精卵中。

TAP串联亲和纯化试剂盒应用

TAP捕获的是样本中天然结合的蛋白复合体，反应了体内真实的生理结合；而且TAP技术特别适合于组学水平上的互作蛋白大规模研究。以下列举了可应用TAP串联亲和纯化试剂盒的几个研究方向：

1、应用于低丰度蛋白的富集和浓缩

2、已知蛋白的功能验证

3、分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物

串联亲和纯化TAP试剂盒组分（20次）

TAP串联亲和纯化检测试剂盒优势

1、既可用于TST和Flag双标签蛋白的串联纯化，又可用于TST或Flag单标签蛋白的纯化；

2、抗体与树脂偶联，因此纯化复合物中几乎不含抗体污染，Western Blot或LC-MS检测不受影响；

3、串联纯化可以有效降低互作蛋白的假阳性率，使后续验证更加简单；

4、亲和材料经过特殊优化，与诱饵蛋白结合更多且结合力更强。

TAP实验试剂盒使用流程简述

1. 将细胞裂解液与TST树脂，室温下孵育1-2小时，或4 ℃过夜。

2. 在室温下，经过漂洗，洗脱得到洗脱液1。

3. 在洗脱液1中加入到Flag树脂中，室温孵育2-3小时，或4 ℃过夜。

4. 室温下，漂洗，加洗脱缓冲液B得到最终洗脱产物。

TAP试剂盒-客户文献

1. Novel interacting proteins identified by tandem affinity purification coupled to nano LC-MS/MS interact with ribosomal S6 protein kinase 4 (RSK4) and its variant protein (RSK4m). Int J Biol Macromol. 2017. IF= 7.8. 

2. Differential Rac1 signalling by guanine nucleotide exchange factors implicates FLII in regulating Rac1-driven cell migration. Nature communication. 2016. IF=16.6.