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iTRAQ实验技术检测过表达KiSS-1基因的蛋白质组变化

摘要:KiSS基因是一种参与实体瘤发展的转移抑制基因。该基因的表达缺失与肿瘤的进展、远距离转移以及膀胱癌的低存活率逆相关。为了在膀胱癌中鉴定与KiSS-1基因转移抑制作用相关的分子途径,本文采用iTRAQ实验技术分析了转染KiSS-1基因的膀胱癌细胞系(EJ138)中的蛋白质组。收集转染24小时和48小时后的细胞提取蛋白,然后用iTRAQ试剂标记。这些标记的肽类经过强离子交换实验和反相色谱层析实验分离开,并用MALDI-TOF/TOF MS实验技术进一步分析。应用软件包数对据进行分析:包括ProteinPilot、Protein Center和Ingenuity Pathways Analysis。比较转染的、模拟的和转空载体的细胞,鉴别出1529个置信度比较高的蛋白。这些鉴定的蛋白在生物网络中表现出与KiSS-1表达分子途径相关的特征,并通过Western blot实验技术对一些关键的蛋白进行验证。作为补充,取临床标本进行免疫组化实验技术分析了由KiSS-1调节的蛋白,如Filamin A。总之,本文不仅揭示了转移抑制基因KiSS-1在膀胱癌中的相关分子机制,而且揭示了Filamin A在膀胱癌进展和临床结果中的作用。


实验技术:本文通过瞬时转染实验技术转染膀胱癌细胞EJ138,然后用iTRAQ实验技术,结合强离子交换实验技术、反液相色谱实验技术和MALDI-TOF/TOF MS实验技术分离鉴定了多种表达差异性蛋白,然后用ProteinPilot实验技术、Protein Center实验技术和Ingenuity Pathways Analysis实验技术对数据进行分析,最后用western blot实验技术、免疫组化实验技术对一些关键的蛋白和标志物分子Filamin A进一步进行验证,揭示了KiSS-1在膀胱癌中分子机制、FilaminA在膀胱癌进展和临床结果中的作用。说明iTRAQ实验技术对于研究膀胱癌转移机制、发现参与防御和治疗相关的分子靶点或生物标志物有重要的作用。


意义:本文首次应用iTRAQ实验技术研究膀胱癌转移机制,对发现防御和治疗相关的分子靶点有重要作用。


文献来源: Molecular & Cellular Proteomics 9:2276–2291, 2010
 

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