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【实验步骤答疑】怎么成功做E-Gel琼脂糖凝胶电泳?

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1.Q:对于E-Gel®琼脂糖凝胶电泳时间可以比建议时间更长吗?

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对于单排胶孔凝胶,电泳时间不要超过60分钟,对于双排胶孔凝胶,电泳时间不要超过25分钟。电泳时间过长离子将被耗尽,凝胶将被损坏。
对于E-Gel® 48琼脂糖凝胶,电泳时间不要超过30分钟,对于E-Gel® 96琼脂糖凝胶,电泳时间不要超过20分钟。

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2.Q:一个单一载体在电泳结束后琼脂糖凝胶上出现多条DNA条带这是为什么?

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DNA质粒的构象会影响它在凝胶内的迁移。质粒DNA可以是超螺旋的(天然3D构象),有切口环状的(一条链上有切口),或者线性的(两条
链都有切口)。你可能在琼脂糖凝胶上看到所有这三种形式。其中超螺旋DNA迁移最快,在凝胶中的位置最靠下;线性DNA条带在凝胶中位于
中间位置,而带有切口的DNA通常出现在凝胶最顶部,因为它迁移最慢。


3.Q:我不小心将 E-Gel®琼脂糖凝胶保存在了4°C而不是室温我还能使用它们吗?

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虽然我们建议将它们保存在室温,但这些凝胶仍然可以使用。在电泳前将这些凝胶平衡至室温以获得最佳效果。

 

4.Q:我的E-Gel®琼脂糖凝胶在电泳时出现不均一现象,条带分辨率低或者有拖尾现象。怎么才能解决这一问题?

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可能的原因有:

  • 上样了太多的DNA。我们建议每孔上样20–100 ng DNA;但是,你可以每孔上样最多500 ng。

  • 使用了高盐浓度的样本。样本中离子浓度>50 mM NaCl,100 mM KCl, 10 mM醋酸离子,或100 mM EDTA时,将降低分辨率。

  • 样本可能使用了TAE稀释,而不是使用了TE或者水。

  • 电泳时间过长。我们建议电泳25-30分钟以获得平直的条带。不要电泳超过60分钟,否则凝胶将被损坏。

  • 使用了过高电压或过强电流。如果使用带电源的E-Gel®基座,电泳时应使用60–70 V (恒定电压) or 40–50 mA (恒定电流)。
    电流不能超过60 mA。

  • 在E-Base™仪器上电泳E-Gel® 96琼脂糖凝胶时,确保您使用的是“EG”程序而非“EP”程序,“EP”程序是用于E-PAGE™凝胶的。

  • 样本上样不正确或样本上样量太低。

  • 凝胶没有在上样后立即电泳(为获得最好结果,请在上样后15分钟内开始电泳)。

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5.Q:我在进行E-Gel®琼脂糖凝胶电泳时样本从孔内渗出。这是什么原因造成的?

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请确保您没有过量上样并且在移除梳子时胶孔没有被损坏。

 

6.Q:我的E-Gel® iBase™/PowerBase™/E-Base™系统持续发出蜂鸣声或持续亮红灯。我做错什么了吗?

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请检查 E-Gel®胶盒和铜电极。你可以换一个新的胶盒看看是否接触不良。过冷的胶盒或不恰当的操作条件也可能造成这个问题。
胶盒应在室温使用,避免将其保存在4°C。

 

7.Q:我的 E-Gel®琼脂糖凝胶在成像仪内观察时出现斑块。我应该怎么办?

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这里是一些建议:

  • 用酒精和Kimwipes®纸巾擦拭胶盒。

  • 对相机镜头进行清洁。

  • 对成像系统的曝光时间和亮度选项进行调整。

 

8.Q:和iBase™电源系统配套使用的E-Gel® Safe Imager™实时透射仪不工作了。我应该怎么办?

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请检查iBase™电源系统的电源线。PowerBase™ v.4系统和E-Gel® Safe Imager™实时透射仪的电源线经常被混淆。如果用错电源线,
虽然风扇和LED灯将正常工作,但蓝光灯将不会工作。你需要使用iBase™电源线,它上面写有“48V”。

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9.Q:我在进行E-Gel® EX琼脂糖凝胶电泳时没有电流这是为什么?

 

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这里是胶跑得不正常的一些常见原因:

  • 底座的铜电极因为不当使用而损坏。请确保底座的铜电极是完好的。

  • 您使用的胶盒已经过期或有瑕疵。

  • E-Gel® EX胶盒没有正确的插入底座。

  • 您使用了错误的适配器。

 

10.Q:我使用E-Gel® EX琼脂糖凝胶电泳时分辨率低或者有拖尾现象。这是为什么?

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这里是一些可能的原因以及解决问题的建议:

  • 过量上样。请不要上样超过建议的量。

  • 高盐浓度。请稀释样本。

  • 对E-Gel® EX琼脂糖凝胶进行了预电泳,这类凝胶是不建议进行预电泳的。

  • 上样体积过小或者上样方法不正确。

  • 上样时可能引入了气泡。气泡会导致条带弯曲。请根据凝胶种类和上样方法加入推荐体积的样本。为获得合适的条带分离效果,
    我们建议保持上样量一致。向所有空孔内加入去离子水或TE,并且避免引入气泡。

  • 没有在上样后立即进行电泳。请在上样后一分钟内开始电泳。

  • E-Gel®琼脂糖凝胶可能过期了。请检查产品效期。

  • 电泳时间过长或电流过高。较长的电泳时间会引起电流的上升,导致条带迁移较差或者凝胶融化。对于每种凝胶类型,电泳
    不要超过建议的时间。

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