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Flag-TST双标签免疫沉淀/免疫共沉淀试剂盒

描述

双标签免疫沉淀/免疫共沉淀试剂盒,包含足够完成 20 个反应的试剂,每个TAP反应,TST树脂需要 100μL,flag树脂需要 50 μL。

储存条件
收到本产品后flag树脂和洗脱液于 -20 ℃ 贮存,其他产品于 4 ℃ 贮存。
辉骏生物:Flag-TST双标签免疫沉淀/免疫共沉淀试剂盒



产品简介
辉骏生物双标签免疫沉淀  /免疫共沉淀试剂盒能够高效完成单标签融合蛋白或双标签融合蛋白免疫共沉淀实验。以双标签融合蛋白做TAP为例,将Flag标签、TST标签与诱饵蛋白在目的细胞中融合表达,第一步用TST树脂来粗调取诱饵蛋白的互作蛋白,然后将这一步的洗脱液加入到第二步Flag树脂中来更进一步调取诱饵蛋白的互作蛋白。本试剂盒不仅可以调取Flag或TST单标签融合蛋白及其互作蛋白,又可以调取Flag和TST双标签融合蛋白及其互作蛋白,另外相对于传统的Flag-HA  IP试剂盒,本试剂盒具有产物中不含抗体且蛋白没有变性的优点,其产物做Western Blot检测时不会受IgG影响,最后本试剂盒中亲和材料与诱饵蛋白结合多且强,调取的互作蛋白更多。

FLAG-tag 是一段由8个氨基酸残基组成,N-DYKDDDDK-C (1012 Da),其作用是标记蛋白。在蛋白表达和定位研究中,可以通过基因工程技术手段将所要研究的目的基因和FLAG-tag基因序列连接起来,可以连接在目的蛋白的C端或N端,然后将整合后的基因转入细胞中或胚胎干细胞亦或受精卵中。TST标签是strep-tagⅡ(Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys)的升级版,由两个strep-tagⅡ外加连接臂组成,与融合蛋白结合能力更强,结合位点更多,其作用是标记蛋白。在蛋白表达和定位研究中,可以通过基因工程技术手段将所要研究的目的基因和TST-tag基因序列连接起来,可以连接在目的蛋白的C端或N端,然后将整合后的基因转入细胞中或胚胎干细胞亦或受精卵中。


流程简述
1. 将细胞裂解液与TST树脂,室温下孵育 1-2 小时,或 4 ℃过夜。
2. 在室温下,经过漂洗,洗脱得到洗脱液1。
3. 在洗脱液1中加入到Flag树脂中,室温孵育 2-3 小时,或 4 ℃过夜。
4. 室温下,漂洗,加洗脱缓冲液B得到洗脱复合物。


所需额外试剂和仪器
• 磷酸盐缓冲液(PBS,100 mM 磷酸钠,100 mM 氯化钠;pH 7.2)
• Flag抗体
• TST抗体
• 混匀仪


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