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总细胞蛋白的提取与分析
对于每个大肠杆菌表达的目的蛋白,确定其产生、定位及估计培养基或细胞中的产量都相当重要。为了简化确定工作,通常对总细胞蛋白及培养液、周质、可溶胞质和不溶胞质部分进行小规模分析。分析的结果有利于诱导条件优化或确定大规模诱导条件,以及采用合适的蛋白抽提方
外泌体分离方法哪种好?
外泌体(exosomes)是细胞分泌的纳米级小泡,这些微囊泡的直径通常约30-150纳米,内部包含蛋白质、 RNA 等重要细胞分子。之前的研究表明,外泌体可作为癌症、神经退行性疾
规避CRISPR的“脱靶效应”,关键在引导RNA
CRISPR-Cas9基因编辑技术的有效运行依赖于Cas9酶在特定目标位点切割DNA。但是,这一技术却面临着脱靶的风险,即Cas9酶可能会在错误的位置剪切。我们都知道,编辑了预想之外的基因,很有可能会带来不可预控的严重后果。 通常,我们检测非靶标突变(off-target mutations
超实用外泌体数据库,你有用过吗?
1983年,外泌体被人类发现,当时被认为是是细胞废弃物而未受关注,2013年,诺贝尔生理学或医学奖授予了在细胞内囊泡(外泌体)运输调控机制领域作出重要贡献的三位科学家,将外泌体相关研究的热度推向高潮。由于在临床上的巨大应用价值,近几年外泌体成为科研热点,相
【技术贴】免疫共沉淀实验操作步骤(Co-Immunoprecipitation)
一原理: 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation) 是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间
Western杂交(抗原—抗体杂交)
检测目的基因是否进入到受体细胞的方法,一般包括分子水平检测和个体水平检测。其中分子检测有3个层次: 1目的基因是否整合到受体细胞染色体DNA上; 2目的基因是否转录出MRNA,3目的基因是否翻译出蛋白质。1和2都可以用DNA分子杂交技术检测; 3可以用 抗体-抗原 的方法检
如何做好抗体纯化实验?
1、优质的抗体包括的条件: 1).抗体的纯度大于95%(这儿的纯度是指有用抗体的含量而不是单纯的电泳纯度); 2).抗体的活性(效价高); 3).抗体的稳定性(4℃保存10天无沉积,-20℃保存3年以上效价无明显变化,反复冻融10次无沉积)。 2、ProteinA/G纯化的不利因素: P
质谱立大功!首张人体肺部的脂质组图谱出炉
美国太平洋西北国家实验室和罗切斯特大学领导的研究团队近日利用质谱分析技术,绘制出第一张人体器官特异的脂质组图谱肺部。 近年来,不同类型细胞的转录组和蛋白质组已经陆续发布,包括大脑、心脏和肝脏中的主要细胞类型,这些有助于我们更好地了解人体每个器官的功能
做ChIP-seq 4大准备操作
ChIP-seq是一种结合免疫共沉淀和二代测序来研究组蛋白或转录因子与DNA之间相互作用的技术。在这类研究中,很多因素都会影响研究结果,因此要做足功课才能获得一个接近完美的研究结果。需要做哪4大准备工作?辉骏生物带着大家一起来学习了解。 1、样本准备 ChIP 实验中
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