服务项目 / Our professional service 辉骏首页>服务项目>蛋白质组学服务>

SILAC应用之蛋白质互作实验服务

蛋白质组学年终大促销,双向电泳,CO-IP,iTRAQ,SILAC,DIGE等技术服务全场85折起,还有机会拿走终极大礼iPhone6哦~   

一、SILAC研究蛋白质相互作用概述
        
SILAC (Stable isotope labeling with amino acids in cell culture,SILAC) 寻找相互作用蛋白是SILAC
在定量蛋白质组学研究基础上的进一步应用。其基本原理是通过质谱鉴定和分析蛋白质相对量来判断是否是特异性结合诱饵蛋白,当实验组与对照组中某个蛋白质量含量达到统计学的差异时,就判定这个蛋白质与诱饵蛋白质具有相互作用。

 

二、与传统的免疫共沉淀(CoIP)或Pull down相比,SILAC技术研究蛋白质相互作用具有以下优势
  1、特异性强,假阳性极低;      
  2高通量,液相与质谱连用,能最大限度的寻找到相互作用的蛋白质;    
  3、灵敏度高;
  4、能直接检测出与bait蛋白互作的其它蛋白的相对含量。

 

 

三、SILAC研究蛋白质相互作用技术服务流程


实验流程:


实验方案:
方案一:以正常细胞株为实验材料
  1. 分别用轻、重链氨基酸培养细胞,培养至第5~6代时取等量细胞混合并提取蛋白质;
  2. 提取的轻链、重链细胞总蛋白分别用Normal IgG和抗bait蛋白的特异抗体做免疫沉淀(IP);
  3. 混合轻、重链IP产物,SDS-PAGE分离;
  4. 胶内酶切,肽段抽提、纯化、鉴定和定量(图1:成对出现的峰为非特异性结合蛋白)。

 
正常细胞株的SILAC-IP实验设计
                                        图1 正常细胞株的SILAC-IP实验设计

方案二:以过表达bait蛋白的细胞株为实验材料
  1. 分别用轻、重链氨基酸培养正常对照细胞和过表达bait蛋白的细胞株(带标签),培养至第5~6代时取等量细胞混合并提取蛋白质;
  2. 提取的轻链、重链细胞总蛋白均用标签蛋白抗体做IP;
  3. 混合轻、重链IP产物,SDS-PAGE分离;
  4. 胶内酶切,肽段抽提、纯化,质谱鉴定和定量(图2:成对出现的峰强一致的峰为非特异性结合蛋白)。

 
过表达细胞株的SILAC-IP实验设计
                                       图2 过表达细胞株的SILAC-IP实验设计

方案三:以RNAi bait基因的细胞株为实验材料
  1. 分别用轻链、重链氨基酸培养RNAi bait基因的细胞株和正常对照细胞株,培养至第5~6代时取等量细胞混合并提取蛋白质;
  2. 提取的轻链、重链细胞总蛋白均用抗bait蛋白的特异抗体做IP;
  3. 混合轻、重链IP产物,SDS-PAGE分离;
  4. 胶内酶切,肽段抽提、纯化,质谱鉴定和定量(图3:成对出现且峰强一致的为非特异性结合蛋白;由于RNAi组的细胞株内bait蛋白含量下降,因而与其相互作用的蛋白的丰度也相对较低,表现为峰强的减弱)。
RNAi细胞株的SILAC-IP实验设计
                                   图3 RNAi细胞株的SILAC-IP实验设计


四、SILAC研究蛋白质相互作用结果简要说明

 
 

                   图4SILAC分析蛋白质相互作用的质谱峰图及被鉴定蛋白的生物信息分析

 

五、SILAC研究蛋白质相互作用技术服务内容
  
1、细胞同位素标记;(本公司出售L、M、HLysArg
  
2样本制备与定量
  3、SDS-PAGE分离后液相分离和质谱分析
  4、数据库检索;相互作用蛋白分析;

  5、相互作用蛋白的生物信息分析
  6、实验报告提交。

 

六、送样须知

 1、技术服务咨询:在您开始实验之前,本公司将为竭诚您提供给类科学、严谨的SILAC实验设计方案。
 2、为了保证
SILAC实验能顺利进行,样品寄送需满足以下要求:
      基本要求:
SILAC只适合标记可在SILAC培养基中培养的细胞、细菌等材料,对于组织、体液、及一些不能在SILAC培养基中培养的细胞不能用SILAC
法标记,具体情况请咨询辉骏生物。
      运输要求:液氮或干冰保存寄送,广州本地客户可上门收样。
      注:样本应避免各类污染和反复冻融。

 

七、实验服务报告内容
  1、蛋白质鉴定;
  2、SILAC鉴定相互作用蛋白质的分析结果;  
  3、顾客指定蛋白质对应的质谱峰图;  
  4、完整的技术服务报告,包括实验步骤、使用试剂、仪器、软件检索参数等。

 

八、实验服务周期及收费标准:咨询本公司

 

九、质量承诺
  1、严谨的SILAC技术服务方案确保结果可靠;
  2、提供
SILAC相互作用蛋白质分析结果。

 

> BACK TO HOME
  • 广州辉骏生物科技有限公司
    地址:广州市萝岗区科学城科技企业孵化园区
    7x24小时客服电话:020-32053431
    企业QQ:
    ©2011-2015 广州辉骏生物科技有限公司 版权所有 粤ICP备09009201号