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microRNA过表达慢病毒载体构建

内容介绍
microRNAs(miRNAs)是一类内源性的非编码RNA。编码miRNA的基因组DNA首先转录形成长的初始miRNA(pri-miRNA),后经Drosha核糖核酸酶切割形成发夹结构的、约70-90bp的RNA前体(pre-miRNA)。Pre-miRNA又被Dicer酶剪切成约20-25bp的单链成熟miRNA,进而发挥转录后调控作用。


miRNA过表达载体构建的主要原理是将pri-miRNA或pre-miRNA序列插入polII启动子下游。其中,pri-miRNA(含侧翼序列)的方式保留了每个miRNA特有的天然双臂结构,效果最好。但对于pri-miRNA序列未知的miRNA,更便捷的方法是体外合成pre-miRNA,并构建到带有mir-30侧翼双臂序列的慢病毒载体中。当miRNA表达载体转入细胞后,可产生茎环结构的pri-miRNA或pre-miRNA,进而在细胞内源的miRNA加工机制下被剪切成成熟的miRNA。


技术优势


microRNA过表达慢病毒载体构建


内容服务


1、合成pre-miRNA或调取pri-miRNA;
     
2、目的序列与miRNA慢病毒载体的连接;
       
3、连接产物的转化;
       
4、测序验证;


服务须知


microRNA过表达慢病毒载体构建


实验周期及费用
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