科研服务

Research Service

DNA pull down

DNA pull down原理

先将含脱硫生物素的DNA pulldown探针结合到链霉亲和素Beads上,再将DNA-Beads和细胞裂解液孵育,这样DNA结合蛋白便一起吸附在Beads上。洗涤掉未结合的蛋白后,再用洗脱液将DNA结合蛋白从Beads洗脱下来,得到DNA pulldown产物。DNA-protein复合物既可以用WesternBlot检测已知蛋白,也可以用质谱鉴定未知蛋白。


DNA pull down应用

筛选或验证和靶DNA结合的蛋白


DNA pull down
流程

DNA pulldown技术流程-辉骏生物.png
1、构建含His或GST标签的诱饵蛋白原核表达载体;
2、原核表达诱饵蛋白(我们采用自诱导培养基培养细菌,能有效降低包涵体的形成);
3、细菌裂解液过柱,带标签的诱饵蛋白被固相化亲和配基捕获,产生“次级亲和支持物”;
4、待测样品裂解液过柱孵育,与诱饵蛋白互作的蛋白被“次级亲和支持物”吸附;
5、清洗,离心,去除未结合的杂蛋白;
6、洗脱,得到诱饵蛋白及其互作蛋白的复合物;
7、如要验证某蛋白X与诱饵蛋白互作,则将6.所得的蛋白复合物与X蛋白的抗体孵育,做Western blot验证即可;
8、如要寻找诱饵蛋白可能的互作蛋白,则需将6.所得的蛋白复合物做LC-MS/MS鉴定。


DNA pull down服务优势

1. 近十年服务经验,服务案例众多;

2. 对围绕DNA结合蛋白开展的整体课题提供全方位指导,包括上下游实验设计和结合蛋白的多方法验证等;

3. 自有蛋白质组学平台,对DNA pull down产物这类微量蛋白的质谱鉴定有十足的把控能力,对后续的生物信息分析有独到的见解;

4. 售后技术支持将一直保持到客户发表文章,确保客户安心进行下游实验及投稿。


DNA pull down服务信息

项目名称

客户提供

结果交付

实验周期

 


DNA pull down

实验样本
DNA片段的基因模板
待验证的蛋白抗体
实验信息表

1、DNA探针电泳图
2、待测蛋白WB检测图
3、结果整理图
4、实验报告

 


3-4周

DNA pull down MS实验样本
DNA片段的基因模板
实验信息表

1、DNA探针电泳图
2、质谱检测结果
3、生物信息学分析结果
4、实验报告

 6-7周


DNA pull down 文章

1.Identification of DNA-binding proteins that interact with the 5'-flanking region of the human D-amino acid oxidase gene by pull-down assay coupled with two-dimensional gel electrophoresis and mass spectrometry. J Pharm Biomed Anal 116:94-100(2015).

2.A requirement for breast-cancer-associated gene 1 (BRCA1) in the spindle checkpoint. Proc Natl Acad Sci U S A 101(49):17108-17113(2004).

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