DNA pull down原理
先将含脱硫生物素的DNA pulldown探针结合到链霉亲和素Beads上，再将DNA-Beads和细胞裂解液孵育，这样DNA结合蛋白便一起吸附在Beads上。洗涤掉未结合的蛋白后，再用洗脱液将DNA结合蛋白从Beads洗脱下来，得到DNA pulldown产物。DNA-protein复合物既可以用WesternBlot检测已知蛋白，也可以用质谱鉴定未知蛋白。
DNA pull down应用
筛选或验证和靶DNA结合的蛋白。
DNA pull down流程
1、构建含His或GST标签的诱饵蛋白原核表达载体；
2、原核表达诱饵蛋白（我们采用自诱导培养基培养细菌，能有效降低包涵体的形成）；
3、细菌裂解液过柱，带标签的诱饵蛋白被固相化亲和配基捕获，产生“次级亲和支持物”；
4、待测样品裂解液过柱孵育，与诱饵蛋白互作的蛋白被“次级亲和支持物”吸附；
5、清洗，离心，去除未结合的杂蛋白；
6、洗脱，得到诱饵蛋白及其互作蛋白的复合物；
7、如要验证某蛋白X与诱饵蛋白互作，则将6.所得的蛋白复合物与X蛋白的抗体孵育，做Western blot验证即可；
8、如要寻找诱饵蛋白可能的互作蛋白，则需将6.所得的蛋白复合物做LC-MS/MS鉴定。
DNA pull down服务优势
1. 近十年服务经验，服务案例众多；
2. 对围绕DNA结合蛋白开展的整体课题提供全方位指导，包括上下游实验设计和结合蛋白的多方法验证等；
3. 自有蛋白质组学平台，对DNA pull down产物这类微量蛋白的质谱鉴定有十足的把控能力，对后续的生物信息分析有独到的见解；
4. 售后技术支持将一直保持到客户发表文章，确保客户安心进行下游实验及投稿。
DNA pull down服务信息
项目名称 | 客户提供 | 结果交付 | 实验周期 |
DNA pull down | 实验样本
DNA片段的基因模板
待验证的蛋白抗体
实验信息表
| 1、DNA探针电泳图
2、待测蛋白WB检测图
3、结果整理图
4、实验报告
|
3-4周 |
| DNA pull down MS | 实验样本
DNA片段的基因模板
实验信息表
| 1、DNA探针电泳图
2、质谱检测结果
3、生物信息学分析结果
4、实验报告
| 6-7周 |
DNA pull down 文章
1.Identification
of DNA-binding proteins that interact with the 5'-flanking region of
the human D-amino acid oxidase gene by pull-down assay coupled with
two-dimensional gel electrophoresis and mass spectrometry. J Pharm
Biomed Anal 116:94-100(2015).
2.A
requirement for breast-cancer-associated gene 1 (BRCA1) in the spindle
checkpoint. Proc Natl Acad Sci U S A 101(49):17108-17113(2004).
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