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miRNA靶基因验证

荧光素酶 (Luciferase)报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测荧光素酶活性的一种报告系统。双荧光素酶报告基因系统指的是在同一细胞中同时表达两种荧光素酶——萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶,利用一个报告基因作为内参来校正另一个报告基因,从而减少细胞活性和转染效率对实验结果的影响。


双荧光素酶报告基因可用于检测启动子活性,或者转录因子和启动子的结合。

 

miRNA靶基因验证技术原理

miRNAs常与靶基因的非翻译区(常为3’UTR)结合,从而抑制整个mRNA的翻译。将待测的miRNA结合位点序列(靶基因3‘UTR全长或结合位点附近500bp序列)构建到荧光素酶基因的下游,将该质粒与miRNA mimics共转染待测细胞;如果miRNA能够结合待测序列,则会抑制上游荧光素酶表达,使荧光素酶底物发光减弱;根据化学发光值判断miRNA是否与待测序列结合。

 

miRNA靶基因验证应用范围

1.miRNA与靶基因结合验证

2.ceRNA机制研究:当加入竞争性的lncRNA或circRNA时,可以通过观察Luciferase活性的变化判断mRNA-miRNA-LncRNA(或circRNA)三者是否存在ceRNA调控机制。

 

技术流程
miRNA靶基因验证技术流程.png

辉骏生物技术优势

化学发光法检测,反应非常灵敏,可以有效的检测体内微小的调控作用。

操作简便,检测结果直观。

 

miRNA靶基因验证服务信息

项目名称

客户提供

结果交付

实验周期

miRNA靶基因验证细胞样本
实验信息表(miRNA序列,3’UTR序列或靶点序列,细胞培养信息等)

报告基因载体(野生和突变型)
双荧光素酶检测结果
实验报告

5-6周(不含细胞培养周期)
ceRNA研究

细胞样本
实验信息表(miRNA序列,3’UTR序列或靶点序列,lncRNA或circRNA序列,细胞培养信息等)


报告基因载体(野生和突变型)lncRNA或circRNA表达载体
双荧光素酶检测结果
实验报告
5-6周(不含细胞培养周期)


miRNA靶基因验证 文章

1.Aryl Hydrocarbon Receptor Promotes IL-10 Expression in Inflammatory Macrophages Through Src-STAT3 Signaling Pathway. Frontiers in Immunology.2018. 【客户文章】

2.KIF4A facilitates cell proliferation via induction of p21-mediated cell cycle progression and promotes metastasis in colorectal cancer. Cell Death and Disease. 2018. 【客户文章】

3.MicroRNA-373 induces expression of genes with complementary promoter sequences. PNAS. 2008.

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