科研服务

Research Service

染色质免疫共沉淀ChIP

染色质免疫沉淀ChIP技术原理

先用甲醛交联细胞内“蛋白-DNA”复合物,并用超声波破碎DNA至适合的长度。细胞裂解后,孵育结合了抗体的珠子,诱饵蛋白通过其抗体便结合到了Beads上,同时和诱饵蛋白互作的DNA,也一起沉淀到Beads上。洗涤掉未结合的DNA后,再用洗脱液将DNA-蛋白复合物从Beads洗脱下来,便得到染色质免疫共沉淀产物。DNA-蛋白复合物去交联后,既可qPCR检测已知DNA片段,也可用二代测序与蛋白互作的DNA片段。

当没有合适的诱饵蛋白抗体时,可以通过表达融合了flag标签的诱饵蛋白,利用flag标签做免疫沉淀。即细胞过表达Flag-Bait,经裂解后与anti-Flag珠子孵育,诱饵融合蛋白与Beads结合,与诱饵融合蛋白互作的DNA“共沉淀”到Beads上,再经洗涤、洗脱后做qPCR或NGS测序。



染色质免疫沉淀ChIP实验流程
ChIP-qPCR实验,染色质免疫共沉淀ChIP技术服务,DNA与蛋白互作外包平台.jpg

带标签的染色质免疫共沉淀流程图:
染色质免疫共沉淀ChIP实验_代做染色质免疫共沉淀实验_ChIP技术检测.jpg

染色质免疫沉淀ChIP技术应用

筛选或验证与诱饵蛋白互作的DNA

 

染色质免疫沉淀ChIP服务*辉骏优势

1. 近十年服务经验,服务案例众多,客户发文Nature Cell Biology等高质量期刊;

2. 可对围绕DNA结合蛋白开展的整体课题提供全方位方案建议;

3. 自有分子及细胞生物实验平台,能有效制定并执行最优的实验路线;

4. 售后技术支持将一直保持到客户发表文章,确保客户安心进行下游实验及投稿。


染色质免疫沉淀ChIP服务信息

项目名称

客户提供

结果交付

实验周期

 



ChIP qPCR

实验样本
诱饵蛋白的IP级抗体
实验信息表(样本信息,诱饵蛋白及待测蛋白信息)

1、诱饵蛋白WB检测图
2、待测基因qPCR检测结果
3、实验报告

 


3-4周

ChIP seq实验样本
诱饵蛋白的IP级抗体
实验信息表(样本信息,诱饵蛋白信息)

1、诱饵蛋白WB检测图
2、测序结果
3、实验报告

6-7周



染色质免疫沉淀ChIP 客户文献

1.Zhuang Q. et al: NCoR/SMRT co-repressors cooperate with c-MYC to create an epigenetic barrier to somatic cell reprogramming. Nature Cell Biology.2018,IF=17.728.
【研究内容】:客户通过RNA-seq证明了NCoR/SMRT共抑制子与多能位点结合,IP实验、ChIP-qPCR分析进一步表明,NCoR/SMRT-HDAC3复合物在OSKM重编程中诱导组蛋白去乙酰化的多能位点。ChIP-seq分析发现,NCoR/SMRT中还存在着一个c-MYC结合基序。研究揭示了NCoR/SMRT共抑制子在重编程中的作用,并提出了c-MYC在这一过程中的双重功能。
使用相关技术:染色质免疫共沉淀ChIP、chip qpcr实验


2.Wang R.H. et al: A requirement for breast-cancer-associated gene 1(BRCA1) in the spindle checkpoint. PANS. 2004,IF=9.58.
【研究内容】:研究表明BRCA1缺陷型细胞的有丝分裂受到影响,存在纺锤体检查点缺陷。客户检测和纺锤体检查点密切相关的几个基因,发现BRCA1缺陷型Mad2基因表达水平变化明显,由此推测BRCA1是通过影响Mad2的表达,从而影响有丝分裂的。DNA pulldown及ChIP-qPCR实验证实了BRCA1可以和Mad2启动子结合,进一步研究发现BRCA1确实上调Mad2从而影响有丝分裂。
使用相关技术:chip技术服务、染色质免疫共沉淀ChIP-seq

相关服务推荐
★ DNA pull down

★ 双荧光素酶检测启动子活性




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