科研服务

Research Service

RNA免疫共沉淀RIP

RNA免疫沉淀RIP实验原理

细胞裂解后,孵育结合了抗体的珠子,诱饵蛋白通过其抗体结合到Beads上,同时和诱饵蛋白互作的RNA,也一起沉淀到Beads上。洗涤掉未结合的RNA后,再用洗脱液将RNA-蛋白复合物从Beads洗脱下来,便得到RNA免疫沉淀产物。RIP产物既可用qPCR检测已知RNA,也可以二代测序检测未知RNA。
当没有合适的诱饵蛋白抗体时,可以通过表达融合了flag标签的诱饵蛋白,利用flag标签做免疫沉淀。即细胞过表达Flag-Bait,经裂解后与anti-Flag珠子孵育,诱饵融合蛋白与Beads结合,与诱饵融合蛋白互作的RNA“共沉淀”到Beads上,再经洗涤、洗脱后做qPCR或NGS测序。


RNA免疫沉淀RIP实验流程

RIP实验,RNA结合蛋白免疫共沉淀,RIP-seq检测实验.jpg

带标签的RNA免疫共沉淀流程图:


RIP-qPCR,rip技术实验,rip实验外包.jpg

RNA免疫沉淀RIP技术应用

筛选或验证与诱饵蛋白互作的RNA

 

RNA免疫沉淀RIP服务*辉骏优势

1. 近十年服务经验,客户成果发表在Nature Methods,Cell Research等高水平期刊上;
2. 可对围绕RNA结合蛋白开展的整体课题提供全方位方案建议;
3. 自有分子及细胞生物实验平台,能有效制定并执行最优的实验路线;
4. 售后技术支持将一直保持到客户发表文章,确保客户安心进行下游实验及投稿。

 

RNA免疫沉淀RIP服务信息

项目名称

客户提供

结果交付

实验周期

 



RIP qPCR

实验样本
诱饵蛋白的IP级抗体
实验信息表(样本信息,诱饵蛋白及待测蛋白信息)

1、诱饵蛋白WB检测图
2、待测基因qPCR检测结果
3、实验报告

 


3-4周

RIP seq实验样本
诱饵蛋白的IP级抗体
实验信息表(样本信息,诱饵蛋白信息)

1、诱饵蛋白WB检测图
2、测序结果
3、实验报告


6-7周


RNA免疫共沉淀RIP 客户文献

1. Bao X.C. et al: Capturing the interactome of newly transcribed RNA.Nature Methods,15(3): 213–220. 2018,IF=28.467.
【研究内容】:辉骏生物为作者单位之一,和作者共同开发了一种捕获鉴定新生RNA结合蛋白的全新方法(RICK)。该方法用EU标记新生RNA,通过点击反应-生物素-链霉亲和素系统结合质谱分析,分离鉴定RNA互作蛋白。其中,METTL1和CDK1是两个RICK独有的RNA结合蛋白。 RIP-qPCR、RIP-Seq、CLIP-Seq等实验进一步证实了它们与非PolyA RNA的结合,这种结合在细胞分化与增殖中发挥了重要作用。
使用相关技术RIP-qPCR、RNA免疫共沉淀RIP-Seq、RNA结合蛋白免疫沉淀技术


2. Bao. X.C. et al: The p53-induced lincRNA-p21 derails somatic cell reprogramming by sustaining H3K9me3 and CpG methylation at pluripotency gene promoters. Cell Research.2015, IF=13.9.

【研究内容】:客户利用RNA pull down、CoIP等技术,发现lincRNA-p21与HNRNPK结合,并和甲基化酶SETDB1、DNMT1形成复合物,作者通过RIP-qPCR进一步证实了细胞中存在该复合物。该复合物甲基化了多能性基因的启动子序列及相应组蛋白,并改变了它们的表达量,从而进一步影响体细胞重编程过程。

使用相关技术RIP seq、RNA结合蛋白疫共沉淀rip qpcr、质谱鉴定


相关服务推荐
★ RNA pull down
 GST pull down
★ DNA pull down
★  ChIRP

★  荧光定量PCR (qPCR)



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