科研服务

Research Service

串联亲和纯化TAP-MS

串联亲和纯化质谱TAP-MS技术原理

过表达TST-Flag双标签融合蛋白的细胞,经裂解后先与Streptactin珠子孵育、初次洗涤及洗脱,释放出蛋白复合物;再将此蛋白复合物与anti-Flag珠子结合、再次洗涤,最后的洗脱产物用质谱鉴定未知的互作蛋白。


串联亲和纯化质谱TAP-MS实验流程

代做串联亲和纯化-质谱,tap ms实验.jpg

串联亲和纯化质谱TAP-MS技术应用

筛选内源性的和诱饵蛋白互作的蛋白

 

几种蛋白互作技术特点    

1. GST pulldown:体外表达诱饵蛋白,简单易行,适合无IP级别抗体、又不易转基因的情况;

2. AP-MS:体内表达带标签的诱饵蛋白,洗脱产物无抗体污染,适合无IP级别抗体、但易转基因的情况;

3. TAP-MS:体内表达带双标签的诱饵蛋白,两次纯化,非特异结合蛋白更少,适合无IP级别抗体、但易转基因的情况;

4. CoIP:基本是天然蛋白复合物分离,能比较好的反应体内真实的蛋白互作情况,适合于有非常好的IP级别抗体的情况;

5. SILAC-IP:可定量鉴定分析体内蛋白复合物,适合于可传代细胞,尤其是易转基因细胞。

 

串联亲和纯化质谱TAP-MS服务*辉骏优势

1. 近十年服务经验,服务客户众多;

2. 对蛋白互作的筛选鉴定理解深刻,擅长针对客户具体情况提出合适的方案建议;

3. 自有分子及细胞生物实验平台,能有效制定并执行最优的实验路线;

4. 自有蛋白质组学平台,对微量TAP实验产物的质谱鉴定有十足的把控能力,对后续的生物信息分析有独到的见解;

5. 售后技术支持将一直保持到客户发表文章,确保客户安心免疫共沉淀下游实验及投稿。

 

串联亲和纯化质谱TAP-MS服务信息

项目名称

客户提供

结果交付

实验周期

 



TAP MS

细胞样本
诱饵蛋白编码区基因模板
实验信息表

1、诱饵蛋白的双标签慢病毒表达载体
2、诱饵蛋白WB检测图
3、质谱检测结果
4、生物信息学分析结果
5、实验报告

 



14-16周


串联亲和纯化质谱TAP-MS 文献解读


1. Reinaldo F.M. et al: Destabilizing NEK2 overcomes resistance to proteasome inhibition in multiple myeloma. The Journal of Clinical Investigation.2020 , IF=11.864.

【研究内容】:每个骨髓瘤患者都有多个亚克隆,具有高或低染色体不稳定性(CIN)特征的多个亚克隆共存会导致异质性和耐药性,导致疾病复发。作者通过串联亲和纯化质谱(TAP-MS)技术,发现了CIN基因NEK2与脱泛素酶USP7结合。该结合阻止了NEK2泛素化并使其稳定。研究发现,使用NEK2或USP7抑制剂进行靶向治疗可能是骨髓瘤最有效的辅助治疗方法。

使用技术串联亲和纯化质谱(TAP-MS)

2.  Li X.et al: Proteomic analyses reveal distinct chromatin-associated and soluble transcription factor complexes.Molecular Systems Biology.2015 ,  IF=8.991.

【研究内容】:转录因子(TF)是细胞信号通路的终极靶标和执行者。在这项研究中,作者对56个TF的可溶性和染色相关复合物进行了蛋白质组学分析,利用串联亲和纯化和质谱(TAP/MS)技术进行纯化,并鉴定其中的蛋白质-蛋白质相互作用。研究为大量的TF提供了有价值的蛋白质-蛋白质相互作用网络资源,强调了TF形成不同位置特异性的蛋白质复合物的一般原理,这些复合物与TF的不同调控和不同功能有关。

使用技术串联亲和纯化质谱(TAP-MS)



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